Línea celular AB9 de pez cebra

Las células AB9 de pez cebra son una línea celular primaria de fibroblastos desarrollada a partir de tejido de aleta de la cepa AB. Estas células se utilizan comúnmente para estudios centrados en las propiedades bioquímicas y moleculares del pez cebra . Las células se cultivan en medio Eagle modificado de Dulbecco (DMEM) suplementado con 15 % de suero fetal bovino (FBS) en una atmósfera húmeda _enriquecida con 5 % de CO2 a 28 °C. ^{[ 1 ]} En estas condiciones, las células con un paso de 1 en 4 se duplicaban cada 72 horas cuando se alimentaban con medio de cultivo fresco a intervalos de 3 días. 

El pez cebra es un vertebrado importante y se ha convertido en un modelo relevante para la genética, la biología del desarrollo, la biología química y la regeneración. Para establecer el cultivo celular, se descorionaron aproximadamente 200-300 embriones de pez cebra de la cepa Ab en la etapa de 5-10 somitas mediante un tratamiento con proteasa de 300 µl/ml y se lavaron con PBS. Posteriormente, se diluyeron 1:400 en PBS durante 2 minutos y se fragmentaron en pequeñas partes con tripsina/EDTA al 0,05%, y se sembraron en  matraces de 25 cm² con recubrimiento de colágeno I. Las células se cultivaron en un medio compuesto de DMEM. El medio se enriqueció además con 25  ng/ml de factor de crecimiento epidérmico humano. Después del segundo pase, las células se cultivaron nuevamente en un medio similar al primero, excluyendo el EGF y el bbFGF. Los fibroblastos embrionarios primarios de pez cebra, ZEF1 y ZEF2, se mantuvieron a 29 °C y 5 % _de CO2 durante dos y tres meses antes de la transfección.

Las células AB9 se incubaron al 5% _de CO2 a 28 °C y se cultivaron en placas de cultivo tisular con medio mínimo esencial (DMEM) suplementado con 15% de FBS inactivado por calor y antibióticos-antimicóticos. Luego, las células se colocaron en cubreobjetos de poli-L-lisina y se dejaron crecer hasta alcanzar una confluencia del 80-90%. Posteriormente, se lavaron con PBS frío y se suspendieron en una solución de paraformaldehído al 4% en PBS durante 30 minutos a temperatura ambiente. Después de 30 minutos, se lavaron nuevamente las células con PBS 1X, tres veces durante cinco minutos. Se perforará la membrana celular con Triton al 0,2% en PBS durante 10 minutos. A continuación, se realizaron múltiples lavados con PBS 1X y se bloquearon a temperatura ambiente durante una hora en BSA al 1% en PBS. Se dejaron reposar durante la noche y, al día siguiente, las células se lavaron con PBS 1X tres veces durante cinco minutos cada vez. Tras lavar las células, las incubamos con el anticuerpo secundario durante una hora a temperatura ambiente, protegiendo la muestra de la luz. A continuación, realizamos tres lavados adicionales de cinco minutos con PBS 1X y un lavado rápido con agua destilada. Las células AB9 se montaron con Vectashield y se examinaron con un microscopio Nikon Eclipse TE2000-U a 60 aumentos.

La inactivación de una proteína implica la reducción de los genes de un organismo. Para inactivar AB9, lo primero que se prueba es si la electroporación es un método fiable para la captación de MO o morfolinos antisentido. Comenzamos electroforalizando MO de cx43 marcado con fluoresceína en células AB9, utilizando MO de control estándar marcado con fluoresceína como control. Observamos una eficiencia del 50-70%. A continuación, probamos la captación de MO por AB9 tras la inactivación de la proteína. Se prepararon lisados ​​a partir de la curva estándar y de células tratadas con MO de cx43 a las 25 hpe. Posteriormente, intentamos determinar si podemos bloquear la función de la proteína tratando AB9 con agentes farmacológicos. El inhibidor en este caso será Hsp47 y tratamos la célula con 100  µm del inhibidor, utilizando DMSO como control.

• Entrada de Cellosaurus para AB9
• Badakov, Rossen; Jaźwińska, Anna (junio de 2006). "Transfección eficiente de fibroblastos primarios de pez cebra mediante nucleofección" . Cytotechnology . 51 ( 2): 105– 110. doi : 10.1007/s10616-006-9018-3 . PMC 3449684. PMID 19002901 .  
• Bhadra, Joyita; Banerji, Rajeswari; Singh, Jasmine; Sallada, Nathanael; Eble, Diane M.; Iovine, Mary Kathryn (2015). "La línea celular de fibroblastos de pez cebra AB9 como herramienta para complementar los estudios de regulación genética" . Regeneración musculoesquelética . 1 .