dilución de agar

La dilución en agar es uno de los dos métodos (junto con la dilución en caldo) que utilizan los investigadores para determinar la concentración mínima inhibitoria (CMI) de los antibióticos. Es el método de dilución más utilizado para probar la eficacia de nuevos antibióticos cuando se prueban unos pocos antibióticos frente a un amplio panel de diferentes bacterias. ^{[ 1 ] : 149 [ 2 ]}

El antibiótico que se va a probar se diluye con agua para producir una serie de concentraciones. Luego, se combina un volumen apropiado con agar fundido para producir placas en las que las concentraciones finales del antibiótico representan una serie de diluciones dobles. Después de esto, se agregan bacterias preparadas a una concentración estándar como un punto en cada placa, con 10⁴ ^unidades formadoras de colonias (UFC) por punto. Esta técnica permite probar puntos replicados de un tipo de bacteria ^{[ 3 ]} o puntos de diferentes bacterias para que se pueda probar la CMI del antibiótico frente a múltiples tipos de bacterias. Los controles necesarios incluyen una placa de control que no recibe ningún antibiótico y placas de extensión bacteriana que demuestran que las bacterias incluidas están en el rango de concentración correcto. Luego, las placas de dilución se incuban a una temperatura de 37 grados Celsius . ^{[ 4 ]} Las placas se incuban luego durante dieciséis a dieciocho horas, aunque el tiempo de incubación puede ser menor para poblaciones bacterianas que se dividen rápidamente. ^{[ 1 ] : 374} Después de la incubación, las placas se examinan para determinar si se ha producido crecimiento bacteriano en los puntos inoculados. La concentración más baja de antibióticos que impidió el crecimiento bacteriano se considera la concentración mínima inhibitoria de ese antibiótico contra esa bacteria. ^{[ 4 ]}

La dilución en agar se considera el método de referencia para las pruebas de sensibilidad, o la forma más precisa de medir la resistencia de las bacterias a los antibióticos. Los resultados de la dilución en agar son fácilmente reproducibles y su seguimiento resulta mucho más económico que el de otros métodos de dilución. Además, permite analizar hasta treinta muestras de patógenos (más dos controles) simultáneamente, lo que la hace útil para pruebas por lotes. ^{[ 1 ] : 149}

Cada placa de dilución en las pruebas de agar debe inocularse manualmente con el patógeno que se va a analizar, por lo que las pruebas de dilución en agar son laboriosas y costosas. ^{[ 1 ] : 149} A diferencia de las pruebas de microdilución en caldo , la dilución en agar no se puede utilizar para analizar más de un antibiótico a la vez. ^{[ 5 ]}