Articulo de referencia

PCR asimétrica

La PCR asimétrica es una variante de la PCR que se utiliza para amplificar preferentemente una hebra del ADN original más que la otra. [ 1 ] Esta técnica tiene aplicaciones en a...

La PCR asimétrica es una variante de la PCR que se utiliza para amplificar preferentemente una hebra del ADN original más que la otra. [ 1 ] Esta técnica tiene aplicaciones en algunos tipos de secuenciación y sondas de hibridación donde solo se requiere una de las dos hebras complementarias . [ 2 ]

Metodología

La PCR asimétrica se diferencia de la PCR convencional por la cantidad excesiva de cebadores para una hebra específica. Debido a la lenta amplificación (aritmética) que se produce posteriormente en la reacción (una vez agotado el cebador limitante), se requieren ciclos adicionales de PCR. [ 3 ]

Una modificación de este proceso, conocida como PCR lineal después de la exponencial (LATE-PCR) , utiliza un cebador limitante con una temperatura de fusión más alta que el cebador en exceso para mantener la eficiencia de la reacción a medida que la concentración del cebador limitante disminuye a mitad de la reacción. [ 4 ]

Aplicaciones

La PCR asimétrica se puede utilizar para formar ADN monocatenario a partir de ADN bicatenario, que luego se utiliza para la secuenciación de ADN en el método de mutagénesis . El ADN monocatenario también es importante para la generación de aptámeros . [ 1 ]

Referencias

  1. 1 2 Citartan, Marimuthu; et  al. (diciembre de 2011). "PCR asimétrica para la generación de ssDNA de buena calidad para la producción de aptámeros de ADN" (PDF) . Songklanakarin J. Sci. Technol . 34 (2): 125– 131. Archivado del original (PDF) el 11 de enero de 2020. Recuperado el 18 de noviembre de 2017 .
  2. Wooddell, CI; Burgess, RR (1996). "Uso de PCR asimétrica para generar cebadores largos y ADN monocatenario para incorporar análogos de entrecruzamiento en sitios específicos de una sonda de ADN" . Genome Res . 6 (9): 886–892 . doi : 10.1101/gr.6.9.886 . PMID 8889557 . 
  3. Heiat, Mohammad; et al. (14 de enero de 2017). "Estrategias esenciales para optimizar las condiciones de PCR asimétrica como un método fiable para generar una gran cantidad de aptámeros de ssDNA". Biotechnology and Applied Biochemistry . 64 (4): 541– 548. doi : 10.1002/bab.1507 . PMID 27222205 . S2CID 21792777 .   
  4. Sánchez, J. Aquiles; et al. (4 de diciembre de 2003). "Linear-After-The-Exponential (LATE)–PCR: Un método avanzado de PCR asimétrica y sus usos en el análisis cuantitativo en tiempo real" . Actas de la Academia Nacional de Ciencias . 101 (7): 1933– 1938. doi : 10.1073/pnas.0305476101 . PMC 357030. PMID 14769930 .