Secuencia de replicación autónoma

Una secuencia de replicación autónoma ( ARS o ars ^{[ 1 ]} ) contiene el origen de replicación en el genoma de la levadura . La ARS de S. cerevisiae tiene un tamaño mínimo de 125 pb y contiene cuatro regiones (A, B1, B2 y B3), denominadas en orden de su efecto sobre la estabilidad del plásmido . El dominio A está altamente conservado; cualquier mutación anula la función del origen. Las mutaciones en B1, B2 y B3 disminuirán, pero no impedirán, el funcionamiento del origen.

El elemento A está altamente conservado y consta de la siguiente secuencia consenso:

5'- T/ATTTAYRTTTT/A -3'

(donde Y es pirimidina y R es purina ). Cuando este elemento muta, la ARS pierde toda su actividad.

Como se observa arriba, los ARS son considerablemente ricos en AT, lo que facilita que las proteínas replicativas interrumpan los enlaces de hidrógeno en esa zona. El complejo proteico ORC ( complejo de reconocimiento del origen ) se une a los ARS durante todo el ciclo celular , permitiendo que las proteínas replicativas accedan a ellos.

Los análisis mutacionales de los elementos ARS de la levadura han demostrado que cualquier mutación en las regiones B1, B2 y B3 reduce la función del elemento ARS. Una mutación en la región A provoca una pérdida total de su función.

La fusión del ADN ocurre dentro del dominio B2, inducida por la unión del factor de unión ARS 1 al dominio B3. Los dominios A1 y B1 se unen al complejo de reconocimiento del origen.

Para identificar estas secuencias, ^{[ 2 ]} se transformaron mutantes de levadura incapaces de sintetizar histidina con plásmidos que contenían el gen His y fragmentos aleatorios del genoma de la levadura. Si el fragmento del genoma contenía un origen de replicación, las células podían crecer en un medio sin histidina. Estas secuencias se denominaron secuencias de replicación autónoma, porque se replicaban y heredaban por la progenie sin integrarse en el cromosoma del huésped .