Frotis de sangre

Un frotis de sangre , también conocido como frotis de sangre periférica o extensión de sangre, es una fina capa de sangre extendida sobre un portaobjetos de vidrio y teñida para permitir el examen microscópico de las distintas células sanguíneas. Los frotis de sangre se utilizan en la investigación de trastornos hematológicos (sanguíneos) y se emplean habitualmente para detectar parásitos sanguíneos , como los de la malaria y la filariasis .

Para realizar una extensión de sangre, se coloca una gota de sangre en un extremo de un portaobjetos y se utiliza un separador para distribuirla a lo largo del mismo. El objetivo es obtener una región, denominada monocapa, donde las células estén lo suficientemente separadas como para poder contarlas y diferenciarlas. La monocapa se encuentra en el borde irregular que crea el separador al extender la sangre.

Sin manchas

Teñido con Wright-Giemsa

Primeros planos del borde difuminado de las manchas de sangre. La banda central pálida del degradado es la monocapa.

La muestra se deja secar al aire, tras lo cual la sangre se fija sumergiéndola brevemente en metanol . El fijador es esencial para una buena tinción y la visualización de los detalles celulares. Después de la fijación, la muestra se tiñe para diferenciar las células entre sí.

El análisis rutinario de sangre en laboratorios médicos se realiza habitualmente en frotis sanguíneos teñidos con tinciones de Romanowsky , como la tinción de Wright , la tinción de Giemsa o la tinción Diff-Quik . La tinción combinada de Wright-Giemsa también es una opción popular. Estas tinciones permiten detectar anomalías en los glóbulos blancos , los glóbulos rojos y las plaquetas . Los hematopatólogos suelen utilizar otras tinciones especializadas para ayudar en el diagnóstico diferencial de los trastornos sanguíneos.

Tras la tinción, la monocapa se observa bajo un microscopio con un aumento de hasta 1000x. Se examinan las células individuales y se caracteriza y registra su morfología. ^{[ 1 ] [ 2 ]}

La imagen de la izquierda muestra una vista microscópica de una extensión de sangre normal de un adulto, mientras que la imagen de la derecha muestra una extensión de sangre de un paciente con leucemia mieloide crónica .

El examen de frotis de sangre se realiza habitualmente junto con un hemograma completo para investigar resultados anormales o confirmar resultados que el analizador automatizado ha marcado como poco fiables. ^{[ 3 ]}

El examen microscópico de la forma, el tamaño y la coloración de los glóbulos rojos es útil para determinar la causa de la anemia . Trastornos como la anemia por deficiencia de hierro , la anemia falciforme , la anemia megaloblástica y la anemia hemolítica microangiopática producen anomalías características en el frotis de sangre. ^{[ 2 ]}

Las proporciones de los diferentes tipos de glóbulos blancos se pueden determinar a partir del frotis de sangre. Esto se conoce como recuento diferencial manual de glóbulos blancos . El recuento diferencial de glóbulos blancos puede revelar anomalías en las proporciones de los tipos de glóbulos blancos, como neutrofilia y eosinofilia , así como la presencia de células anormales, como los blastos circulantes observados en la leucemia aguda . ^{[ 4 ]} Las anomalías cualitativas de los glóbulos blancos, como la granulación tóxica , también son visibles en el frotis de sangre. Los analizadores modernos de hemograma completo pueden proporcionar un recuento diferencial de glóbulos blancos automatizado, pero tienen una capacidad limitada para diferenciar células inmaduras y anormales, por lo que con frecuencia se indica el examen manual del frotis de sangre. ^{[ 5 ] [ 6 ]}

El examen de frotis de sangre es el método diagnóstico preferido para ciertas infecciones parasitarias, como la malaria y la babesiosis . ^{[ 7 ]} En raras ocasiones, pueden observarse bacterias en el frotis de sangre en pacientes con sepsis grave . ^{[ 8 ]}

El método diagnóstico preferido y más fiable para la malaria es el examen microscópico de frotis de sangre, ya que cada una de las cuatro principales especies de parásitos presenta características distintivas. Tradicionalmente se utilizan dos tipos de frotis de sangre. ^{[ 9 ]}

• Las extensiones finas son similares a los frotis de sangre habituales y permiten la identificación de especies, ya que la apariencia del parásito se conserva mejor en esta preparación.
• Las extensiones gruesas permiten al microscopista examinar un mayor volumen de sangre y son aproximadamente once veces más sensibles que las extensiones finas, por lo que detectar niveles bajos de infección es más fácil en la extensión gruesa, pero la apariencia del parásito está mucho más distorsionada y, por lo tanto, distinguir entre las diferentes especies puede ser mucho más difícil. ^{[ 10 ] [ 9 ]}

A partir de una muestra gruesa, un microscopista experimentado puede detectar todos los parásitos que encuentre. El diagnóstico microscópico puede ser difícil porque los trofozoítos tempranos ("en forma de anillo") de las cuatro especies son idénticos y nunca es posible diagnosticar una especie basándose en un solo anillo; la identificación de la especie siempre se basa en varios trofozoítos.

El mayor problema en la mayoría de los laboratorios de los países desarrollados es el retraso excesivo entre la toma de la muestra de sangre y la preparación de los frotis sanguíneos. A medida que la sangre se enfría a temperatura ambiente, los gametocitos masculinos se dividen y liberan microgametos : estructuras filamentosas largas y sinuosas que pueden confundirse con organismos como Borrelia . Si la sangre se mantiene a temperaturas más altas, los esquizontes se rompen y los merozoítos que invaden los eritrocitos dan erróneamente la apariencia de la forma accolé de P. falciparum . Si P. vivax o P. ovale se dejan durante varias horas en EDTA, la acumulación de ácido en la muestra provoca que los eritrocitos parasitados se encojan y el parásito se enrolle, simulando la apariencia de P. malariae . Este problema se agrava si se utilizan anticoagulantes como la heparina o el citrato . El anticoagulante que causa menos problemas es el EDTA . Generalmente se utiliza la tinción de Romanowsky o una tinción variante. Algunos laboratorios utilizan erróneamente el mismo pH de tinción que para los frotis de sangre hematológicos de rutina ( pH 6,8): los frotis de sangre para la malaria deben teñirse a pH 7,2, o no se verán los puntos de Schüffner ni los puntos de James .

Los procedimientos de captura inmunocromatográfica (pruebas de diagnóstico rápido como las pruebas de detección de antígenos de malaria ) son opciones de diagnóstico no microscópicas para el laboratorio que puede no contar con la experiencia microscópica adecuada. ^{[ 11 ]}

• Microfotografías de sangre