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solución de Bouin

La solución de Bouin , o solución de Bouin , es un fijador compuesto utilizado en histología . [ 1 ] Fue inventada por el biólogo francés Pol Bouin y está compuesta de ácido píc...

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La solución de Bouin , o solución de Bouin , es un fijador compuesto utilizado en histología . [ 1 ] Fue inventada por el biólogo francés Pol Bouin y está compuesta de ácido pícrico , ácido acético y formaldehído en una solución acuosa. [ 2 ] El líquido de Bouin es especialmente útil para la fijación de biopsias del tracto gastrointestinal porque este fijador permite una tinción nuclear más nítida y mejor que la formalina tamponada neutra al 10%. No es un buen fijador cuando se debe preservar la ultraestructura del tejido para la microscopía electrónica . Sin embargo, es un buen fijador cuando se debe preservar la estructura del tejido con una textura suave y delicada. El ácido acético en este fijador lisa los glóbulos rojos y disuelve pequeños depósitos de hierro y calcio en el tejido. Una variante en la que el ácido acético se reemplaza por ácido fórmico se puede utilizar tanto para la fijación del tejido como para la descalcificación. [ 3 ] Los efectos de los tres químicos en la solución de Bouin se equilibran entre sí. La formalina provoca que el citoplasma se vuelva basófilo, pero este efecto se equilibra con el del ácido pícrico. Esto da como resultado una excelente tinción de H&E nuclear y citoplasmática . El endurecimiento tisular causado por la formalina se equilibra con la fijación de tejidos blandos que producen los ácidos pícrico y acético. El hinchamiento tisular provocado por el ácido acético se equilibra con la contracción tisular causada por el ácido pícrico. [ 4 ]

Las secciones hidratadas de tejido fijado con formaldehído suelen pretratarse con solución de Bouin para obtener resultados correctos en las tinciones tricrómicas , logrando colores contrastantes en las fibras colágenas y citoplasmáticas (musculares). Los métodos tricrómicos se diseñaron para tejidos fijados en mezclas ácidas que contenían cloruro mercúrico, las cuales ahora se utilizan solo a pequeña escala. Solo se necesita el componente de ácido pícrico de la solución de Bouin para lograr esta corrección de la tinción tricrómica. [ 5 ]

Al utilizar la solución de Bouin, pueden surgir varios problemas potenciales. Debido al formaldehído presente en la solución, puede aparecer pigmento de formaldehído al observar las secciones de tejido bajo el microscopio. El tejido húmedo debe fijarse en la solución de Bouin durante menos de 24 horas. El exceso de ácido pícrico debe eliminarse del tejido mediante lavados con varias soluciones de alcohol y agua, ya que de lo contrario la calidad de la tinción podría deteriorarse con el tiempo. El tejido húmedo fijado en la solución de Bouin debe almacenarse en una solución de alcohol y agua en lugar de en la propia solución de Bouin. Dado que la solución de Bouin contiene formaldehído, ácido pícrico y ácido acético, deben adoptarse las precauciones de seguridad adecuadas para estas sustancias y cumplirse las normativas vigentes. En particular, cabe destacar que el ácido pícrico puede ser explosivo, sensible a la fricción y a los golpes cuando está seco, y en contacto con algunos metales puede formar picratos metálicos inestables.

Con el nombre de "fluido de Bouin", este fijador también se utiliza ampliamente para invertebrados marinos. [ 6 ] Se prepara de la siguiente manera: ácido pícrico, solución acuosa saturada – 75 ml; formalina, solución acuosa al 40% – 25 ml; ácido acético glacial – 5 ml. [ 7 ]

Variaciones

Solución de género

La solución de Gendre es una versión alcohólica de la solución de Bouin. Para su preparación, se utiliza una solución alcohólica saturada con ácido pícrico en lugar de una solución acuosa saturada con ácido pícrico. Esta solución es útil cuando se debe preservar el glucógeno y otros carbohidratos en los tejidos. Se prepara mezclando una solución saturada de ácido pícrico en etanol al 95 % (80 ml) con formalina (formaldehído al 37-40 %) (15 ml) y ácido acético glacial (5 ml). [ 8 ] El fijador de Gendre contiene más ácido pícrico que el de Bouin, debido a su mayor solubilidad (6,23 % p/v) en etanol que en agua (1,23 % p/v). [ 9 ]

Solución holandesa

La solución de Hollande es una versión de la solución de Bouin que contiene acetato de cobre . El acetato de cobre estabiliza las membranas de los glóbulos rojos y los gránulos de los eosinófilos y las células endocrinas , de modo que se produce una menor lisis de estos componentes celulares que en la solución de Bouin convencional. [ 10 ] El fijador de Hollande se prepara añadiendo 6,25 g de acetato cúprico, 10 g de ácido pícrico (en polvo húmedo), 25 ml de formalina (formaldehído al 37-40 %) y 2,5 ml de ácido acético glacial (100 %) a 250 ml de agua. [ 11 ]

Referencias

  1. ↑ Carson, Freida L.; Hladik, Christa (2009). Histotechnology: A Self-Instructional Text (3.ª  ed.). Hong Kong: American Society for Clinical Pathology Press. p.  19. ISBN 978-0-89189-581-7.
  2. ↑ Culling, CFA 1974. Manual de técnicas histopatológicas e histoquímicas (incluidas las técnicas de museo), 3.ª ed. Londres: Butterworths, pág. 49.
  3. ↑ Bancroft, John D.; Gamble, Marilyn, eds. (2008). Teoría y práctica de las técnicas histológicas (6.ª ed.). China: Churchill Livingstone Elsevier. p. 72. ISBN   978-0-443-10279-0.
  4. ↑ Baker, JR 1958. Principios de microtécnica biológica. Londres, Methuen, pp.149-150.
  5. ↑ Kiernan, JA 2015 Métodos histológicos e histoquímicos. Teoría y práctica. Banbury, Reino Unido: Scion, pág. 195.
  6. ↑ Lincoln, Roger J.; Sheals, John Gordon, eds. (1979). Animales invertebrados: colección y conservación (1.ª ed.). Reino Unido: Museo Británico (Historia Natural). pág. 128. ISBN   0-521-296773.
  7. ↑ Culling, CFA 1974. Manual de técnicas histopatológicas e histoquímicas (incluidas las técnicas de museo), 3.ª ed. Londres: Butterworths, pág. 49.
  8. ↑ Culling, CFA 1974. Manual de técnicas histopatológicas e histoquímicas (incluidas las técnicas de museo), 3.ª ed. Londres: Butterworths, pág. 49.
  9. ↑ Dean, JA 1973. Manual de Química de Lange, 11.ª ed. Nueva York: McGraw-Hill, pág. 7-383.
  10. ↑ Carson, Freida L.; Hladik, Christa (2009). Histotechnology: A Self-Instructional Text (3.ª ed.). Hong Kong: American Society for Clinical Pathology Press. p. 19. ISBN   978-0-89189-581-7.
  11. ↑ Gray, P. 1954. The Microtomist's Formulary and Guide. Reimpreso en 1975. Huntington, NY: Kreiger, p.220.