Articulo de referencia

Calcofluor blanco

Tinción fluorescente de levadura con calcofluor-blanco. Las paredes celulares presentan fluorescencia de un color azul intenso. El calcofluor-blanco o CFW es un colorante azul f...

Tinción fluorescente de levadura con calcofluor-blanco. Las paredes celulares presentan fluorescencia de un color azul intenso.

El calcofluor-blanco o CFW es un colorante azul fluorescente utilizado en biología y textiles. Se une a los polisacáridos 1-3 beta y 1-4 beta presentes en las paredes celulares de hongos , plantas y protozoos . En la investigación de biología celular vegetal , se utiliza para teñir las paredes celulares de algas y plantas superiores . [ 1 ] [ 2 ] También es útil en medicina como herramienta sensible para la visualización e identificación de hongos en muestras de biopsia. [ 1 ] [ 3 ]

Uso

Medicamento

CFW puede utilizarse tanto en micología clínica como en parasitología. Las amebas patógenas de vida libre pueden formar quistes que se observan claramente con esta tinción. [ 4 ] CFW puede utilizarse con la tinción de Papanicolaou para potenciar la respuesta de las levaduras en las citologías vaginales. [ 5 ]

Investigación

En investigación, el blanco de calcoflúor también se utiliza para teñir las cicatrices de gemación de las células de levadura, ya que estas presentan un mayor contenido de quitina, lo que provoca una mayor tinción que en el resto de la membrana celular. Gracias a esta tinción, es posible contar las cicatrices de gemación, lo que indica la edad de la célula. Presenta patrones de tinción similares a los de la aglutinina de germen de trigo (WGA), que se une a la N-acetilglucosamina y al ácido siálico en los polisacáridos. Es especialmente útil para el diagnóstico de la mucormicosis . El blanco de calcoflúor puede utilizarse para teñir las placas tecales de los dinoflagelados acorazados . [ 6 ]

Textiles

El CFW es un colorante blanqueador para telas. Es soluble en agua e incoloro al principio. Tiene un efecto blanqueador óptico que se ha utilizado desde la década de 1940 para dar una apariencia más blanca a los textiles. También se agrega comercialmente a los detergentes para ropa como blanqueador. [ 7 ]

Fluorescencia

Esta sección transversal de un helecho muestra la fluorescencia verde brillante y azul brillante que se observa con CFW.

Las soluciones acuosas de calcofluor-white presentan un espectro de absorción de 300 a 412  nm con un pico en 347  nm. La fluorescencia se observa mejor con luz ultravioleta , aunque la luz violeta/azul violeta también produce excelentes resultados. El calcofluor-white es un colorante fluorescente , lo que significa que su longitud de onda de excitación y emisión difieren entre sí. La longitud de onda de excitación es de 380  nm, mientras que la de emisión es de 475  nm. La fluorescencia se aprecia mejor con luz ultravioleta, pero también puede observarse con luz violeta o azul violeta.

Los hongos tienden a mostrar un color verde brillante bajo luz UV/violeta/azul violeta debido a los filtros de barrera utilizados en microscopía para fluorescencia. El blanco de calcoflúor requiere una interpretación cuidadosa de la tinción, ya que algunas reacciones inespecíficas pueden hacer que el fondo adquiera un color amarillo verdoso fluorescente. Esto se puede reducir observando las células bajo luz azul o con otros filtros para obtener la mejor imagen posible. El azul de Evans es una contratinción para el blanco de calcoflúor, ya que puede ayudar a atenuar los tejidos y células del fondo con luz azul. [ 8 ]

Estudios comparativos

En un estudio comparativo de hidróxido de potasio (KOH), Calcofluor-White y cultivos fúngicos para el diagnóstico de onicomicosis fúngica , CFW se consideró el método más sensible para detectar la infección en humanos. El estudio observó que, de 150 pacientes, CFW dio positivo en 95 de ellos. El estudio también revisó las ventajas clave de usar la tinción de Calcofluor-White sobre KOH. Se explicó que CFW requiere un tiempo de detección rápido, ya que se puede ver con objetivos de baja potencia y se puede realizar en un minuto, mientras que KOH requiere aproximadamente de 3 a 4 minutos por portaobjetos. Es un método de detección más rápido y sensible que KOH, y el material de fondo se puede desviar usando CFC.

En un estudio sobre métodos para diagnosticar micosis, una infección fúngica en humanos, se comparó CFW con KOH y Chicago Sky Blue 6B. CFW mostró resultados positivos en el 53,4% de los casos con sospecha de infección por micosis, mientras que Chicago Sky Blue 6B tuvo una precisión del 55%. El estudio demostró que CFW es menos eficaz para la detección rápida en comparación con Chicago Sky Blue 6B, pero es un método eficaz para detectar la infección fúngica. [ 5 ]

Un estudio investigó la detección de Candida en lesiones cancerosas o precancerosas mediante CFW con microscopía de fluorescencia. El estudio buscaba evaluar la eficacia de Calcofluor-White contra una especie de infección micótica que puede causar la muerte o lesiones graves en pacientes inmunocomprometidos. También se investigó la sensibilidad del colorante en comparación con la tinción de Gram y la tinción PAS. El estudio concluyó que era un método rápido y sencillo para el diagnóstico en citopatología e histopatología, aunque relativamente costoso. El estudio también demostró que no se necesitaban técnicas especiales para lograr una tinción eficaz. El colorante tampoco interfiere con la tinción PAS ni con la tinción de Gram. Para citología , Pap-CFW dio una respuesta positiva en 50 de 135 casos, y para histopatología , dio una respuesta positiva en 43 de 135 casos solo con la tinción CFW. El estudio demostró que la tinción mejoraba con la combinación de Pap y CFW. Los resultados indicaron que el colorante era increíblemente eficaz en términos de rapidez de diagnóstico y efectividad, lo que lo hizo superior a Gram positivo y PAS en este estudio en particular. [ 9 ] En general, la tinción tiene ventajas clave para fines de investigación y diagnóstico, pero tiene el problema de ser un poco costosa y no puede ser tan precisa para ciertas especies.

Limitaciones

La tinción con fluorescencia controlada (CFW) muestra una tinción y fluorescencia deficientes en varios organismos fúngicos, incluidos Coccidioides immitis , Histoplasma capsulatum y Cryptococcus neoformans . La tinción con CFW de Pneumocystis carinii en biopsias pulmonares se puede optimizar mediante una tinción inicial con CFW a temperatura ambiente durante cinco minutos, seguida de  una incubación a 65 °C durante cinco minutos. La fluorescencia puede quedar enmascarada por hongos de pigmentación oscura. [ 4 ]

Referencias

  1. 1 2 Herth, W.; E. Schnepf (1980). "El fluorocromo, blanco de calcofluor, se une orientado a las fibrillas de polisacáridos estructurales". Protoplasma . 105 ( 1– 2). Springer: 129– 133. doi : 10.1007/BF01279855 . ISSN 0033-183X . S2CID 37459059 .  
  2. Bidhendi, AJ; Chebli, Y; Geitmann, A (mayo de 2020). "Visualización por fluorescencia de celulosa y pectina en la pared celular primaria de la planta". Journal of Microscopy . 278 (3): 164– 181. doi : 10.1111/jmi.12895 . PMID 32270489. S2CID 215619998 .  
  3. Hoch, HC; CD Galvani; DH Szarowski; JN Turner (2005). "Dos nuevos colorantes fluorescentes aplicables para la visualización de paredes celulares fúngicas". Mycologia . 97 (3): 580– 588. doi : 10.1080/15572536.2006.11832788 . ISSN 0027-5514 . PMID 16392246 .  
  4. 1 2 Harrington, Brian J.; Hageage, George (mayo de 2003). "Calcofluor White: Revisión de sus usos y aplicaciones en micología clínica y parasitología" (Documento). Departamento de Salud Pública y Departamento de Microbiología e Inmunología, Facultad de Medicina de Ohio, Departamento de Patología, Laboratorios Integrados Mercy y Departamento de Microbiología e Inmunología, Facultad de Medicina de Ohio, Toledo, OH.
  5. 1 2 Afshar, Parvaneh; Larijani, Laleh Vahedi; Rouhanizadeh, Hamed (2012–2018). "Una comparación de métodos rápidos convencionales en el diagnóstico de micosis superficiales y cutáneas basadas en tinciones de KOH, azul cielo de Chicago 6B y blanco de calcoflúor" . Revista Iraní de Microbiología . 10 (6): 433– 440. ISSN 2008-3289 . PMC 6414738. PMID 30873272 .   
  6. Fritz, L. y Triemer, R. 1985. Una técnica rápida y sencilla que utiliza blanco de calcoflúor M2R para la visualización de placas tecales de dinoflagelados. Journal of Phycology, 21: 662-664.
  7. Hoch, HC; Galvani, CD; Szarowski, DH; Turner, JN (2005-05-01). "Dos nuevos colorantes fluorescentes aplicables para la visualización de paredes celulares fúngicas". Mycologia . 97 (3): 580– 588. doi : 10.1080/15572536.2006.11832788 . ISSN 0027-5514 . PMID 16392246 . S2CID 203428057 .   
  8. Productos biológicos, Dalynn (septiembre de 2005). "Tinte blanco de calcoflúor" (PDF) . Productos biológicos Dalynn . Catálogo n.° SC15.
  9. ^ Bhavasar, Rashmi SK; Goje, Santosh Kumar; Takalkar, Anant Arunrao; Ganvir, Sindhu M.; Hazarey, Vinay K.; Gosavi, Suchitra R. (2010). "Detección de Candida por Calcofluor White". Acta citológica . 54 (5): 679– 684. doi : 10.1159/000325232 . ISSN 0001-5547 . PMID 20968155 . S2CID 3359124 .   
  • Página de documentación del producto de Fluka.