Portaobjetos de microscopio

Un portaobjetos es una lámina delgada y plana de vidrio , generalmente de 75 x 26  mm (3 x 1 pulgadas) y aproximadamente 1  mm de grosor, que se utiliza para sostener objetos para su examen bajo el microscopio . Normalmente, el objeto se monta (fija) en el portaobjetos y luego ambos se introducen juntos en el microscopio para su observación. Este sistema permite introducir y extraer rápidamente varios objetos montados en portaobjetos, etiquetarlos, transportarlos y almacenarlos en estuches o carpetas adecuados.

Las láminas para microscopio se suelen utilizar junto con un cubreobjetos, una lámina de vidrio más pequeña y delgada que se coloca sobre la muestra. Las láminas se sujetan a la platina del microscopio mediante pinzas, abrazaderas o una mesa giratoria, que permite un movimiento preciso y remoto de la lámina (por ejemplo, en un sistema automatizado o controlado por ordenador, o cuando no es apropiado tocar la lámina con los dedos debido al riesgo de contaminación o a la falta de precisión).

El origen del concepto radicaba en piezas de marfil o hueso que contenían especímenes entre discos de mica transparente , los cuales se deslizaban en el espacio entre la platina y el objetivo. ^{[ 1 ]} Estos "deslizadores" fueron populares en la Inglaterra victoriana hasta que la Real Sociedad Microscópica introdujo la lámina de vidrio estandarizada para microscopio. ^{[ 2 ]}

Una lámina portaobjetos estándar mide aproximadamente 75  mm x 25  mm (3" x 1") y tiene  un grosor de aproximadamente 1 mm. Existen otros tamaños disponibles para diversos fines especiales, como 75 x 50  mm para uso geológico , 46 ​​x 27  mm para estudios petrográficos y 48 x 28  mm para secciones delgadas . Las láminas suelen estar hechas de vidrio común y sus bordes a menudo están finamente pulidos.

Las láminas para microscopio suelen estar hechas de vidrio de calidad óptica , como vidrio de cal sodada o vidrio de borosilicato , pero también se utilizan plásticos especiales. Las láminas de cuarzo fundido se utilizan a menudo cuando la transparencia ultravioleta es importante, por ejemplo, en microscopía de fluorescencia . ^{[ 3 ] [ 4 ]}

Aunque las láminas planas son las más comunes, existen varios tipos especializados. Una lámina cóncava o con cavidad tiene una o más depresiones poco profundas ("pozos"), diseñadas para contener objetos ligeramente más gruesos y ciertas muestras como líquidos y cultivos de tejidos . ^{[ 5 ]} Las láminas pueden tener esquinas redondeadas para mayor seguridad o robustez, o una esquina recortada para su uso con una pinza para láminas o una mesa transversal, donde la lámina se sujeta mediante un brazo curvo con resorte que entra en contacto con una esquina, forzando la esquina opuesta de la lámina contra un brazo en ángulo recto que no se mueve. Si este sistema se utilizara con una lámina que no incorporara estas esquinas recortadas, las esquinas se astillarían y la lámina podría romperse. ^{[ 5 ]}

Una lámina con retícula está marcada con una cuadrícula de líneas (por ejemplo, una  cuadrícula de 1 mm) que permite estimar fácilmente el tamaño de los objetos observados con aumento y proporciona áreas de referencia para contar objetos diminutos. A veces, un cuadrado de la cuadrícula se subdivide en una cuadrícula más fina. Las láminas para aplicaciones especializadas, como los hemocitómetros para el recuento celular, pueden tener diversos depósitos, canales y barreras grabados o pulidos en su superficie superior. ^{[ 6 ]} El fabricante puede imprimir , arenar o depositar en la superficie diversas marcas o máscaras permanentes , generalmente con materiales inertes como el PTFE . ^{[ 7 ]}

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  Una lámina de Neubauer para el recuento celular.
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  Imagen microscópica de la retícula de una lámina de Neubauer utilizada para contar células .
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  Una lámina de Neubauer sujeta en su lugar sobre un soporte de microscopio mediante una pinza para portaobjetos en una mesa transversal.
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  Portaobjetos de microscopio estándar (75 x 25  mm o 3 x 1 pulgada) y grande (75 x 51 mm o 3 x 2 pulgadas). 

Algunas láminas tienen un área esmerilada o recubierta de esmalte en un extremo, para etiquetar con lápiz o bolígrafo. ^{[ 5 ]} Las láminas pueden tener recubrimientos especiales aplicados por el fabricante, por ejemplo, para inercia química o mejor adhesión celular . El recubrimiento puede tener una carga eléctrica permanente para sujetar muestras delgadas o en polvo. Los recubrimientos comunes incluyen poli-L-lisina , silanos , resinas epoxi , ^{[ 5 ] [ 7 ]} o incluso oro . ^{[ 8 ]}

El montaje de las muestras en portaobjetos de microscopio suele ser fundamental para una correcta observación. Este problema ha recibido mucha atención en los últimos dos siglos y constituye un área bien desarrollada con numerosas técnicas especializadas y, en ocasiones, bastante sofisticadas. Las muestras suelen sujetarse con cubreobjetos de vidrio más pequeños .

La función principal del cubreobjetos es mantener las muestras sólidas planas y las muestras líquidas formando una capa plana de espesor uniforme. Esto es necesario porque los microscopios de alta resolución tienen un área de enfoque muy reducida.

El cubreobjetos suele tener varias funciones adicionales. Mantiene la muestra en su lugar (ya sea por el peso del cubreobjetos o, en el caso de una preparación húmeda, por tensión superficial ) y la protege del polvo y del contacto accidental. Protege la lente del objetivo del microscopio del contacto con la muestra y viceversa; en la microscopía de inmersión en aceite o en agua, el cubreobjetos evita el contacto entre el líquido de inmersión y la muestra. El cubreobjetos se puede pegar al portaobjetos para sellar la muestra, retardando la deshidratación y la oxidación , y también evitando la contaminación. Se utilizan varios selladores, incluidos selladores comerciales, preparaciones de laboratorio o incluso esmalte de uñas transparente común , según la muestra. Un sellador sin disolventes que se puede utilizar para muestras de células vivas es el "valap", una mezcla de vaselina , lanolina y parafina en partes iguales. ^{[ 9 ]} Los cultivos microbianos y celulares se pueden cultivar directamente sobre el cubreobjetos antes de colocarlo en el portaobjetos, y las muestras se pueden montar permanentemente sobre el cubreobjetos en lugar de sobre el portaobjetos. ^{[ 9 ]}

Los cubreobjetos están disponibles en una variedad de tamaños y grosores. ^{[ 10 ]} El uso de un grosor incorrecto puede provocar aberración esférica y una reducción en la resolución y la intensidad de la imagen. Se pueden utilizar objetivos especiales para obtener imágenes de muestras sin cubreobjetos, o bien, pueden tener anillos de corrección que permiten al usuario adaptarse a diferentes grosores de cubreobjetos. ^{[ 11 ] [ 12 ]}

Medios de comunicación en aumento

El medio de montaje es la solución en la que se incrusta la muestra, generalmente bajo un cubreobjetos. Se pueden considerar medios de montaje líquidos simples como agua o glicerol , aunque el término generalmente se refiere a compuestos que se endurecen formando un montaje permanente. Algunos medios de montaje populares incluyen Permount [ ^{14 ]} , el medio de montaje de Hoyer y una alternativa de gelatina de glicerina ^{[ 15 ]. Las} propiedades de un buen medio de montaje incluyen tener un índice de refracción cercano al del vidrio (1,518), no reactividad con la muestra, estabilidad a lo largo del tiempo sin cristalizar, oscurecerse ni cambiar el índice de refracción, solubilidad en el medio en el que se preparó la muestra ( acuoso o no polar , como xileno o tolueno ) y no causar que la tinción de la muestra se desvanezca o se lixivie ^{[ 16 ] .}

Ejemplos de medios de montaje

Acuoso

Se utiliza comúnmente en citoquímica inmunofluorescente, donde la fluorescencia no se puede archivar. El almacenamiento temporal debe realizarse en una cámara oscura y húmeda. Algunos ejemplos comunes son:

1. Glicerol-PBS (9:1) con anticongelante, por ejemplo cualquiera de los siguientes ^{[ 17 ]}
   1. p-fenilendiamina
   2. galato de propilo
   3. 1,4-diazabiciclo (2,2,2)-octano (DABCO) (muy popular)
   4. ácido ascórbico
   5. Mowiol o Gelvatol
2. Gelatina
3. Montar
4. Vectashield
5. Prolongar el oro
6. CyGEL / CyGEL Sustain (para inmovilizar células y organismos vivos no fijados)

No acuoso

Se utiliza cuando se requiere una instalación permanente.

1. Permount (tolueno y un polímero de α-pineno, β-pineno, dipenteno, β-felandreno)
2. bálsamo de Canadá
3. DPX ( Distrene 80 – un poliestireno comercial , un plastificante como el ftalato de dibutilo y xileno )
4. DPX nuevo (con xileno pero sin ftalato de dibutilo cancerígeno )
5. Entellan (con tolueno)
6. Entellan nuevo
7. Medio de cultivo Hoyer de Hempstead Halide (una formulación patentada del medio de cultivo Hoyer tradicional que contiene un 60 % de cloral , pero libre de carcinógenos conocidos).
8. Neo-Mount (compatible con neo-clear alifático pero no compatible con disolventes aromáticos como el xileno)

A diferencia del montaje necesario para cubreobjetos de vidrio, se puede realizar un montaje similar para la conservación de especímenes más voluminosos en recipientes de vidrio en museos. Sin embargo, se realiza un tipo de montaje completamente diferente para la preparación de muestras , que puede ser para materiales biológicos o no biológicos y se subdivide a su vez en procesos de montaje "en caliente" (compresivos) y "en frío" (fundibles). ^{[ 18 ] [ 19 ]} Aunque se denomina "montaje", se asemeja más a la inclusión en histología y no debe confundirse con el montaje descrito anteriormente. El término montaje en otros campos tiene numerosos otros significados.

• placa de Petri