Procedimiento de sección congelada

El procedimiento de sección congelada es un procedimiento de laboratorio patológico para realizar un análisis microscópico rápido de una muestra. Se utiliza con mayor frecuencia en cirugía oncológica . ^{[ 1 ]} El nombre técnico de este procedimiento es criosección . El micrótomo que corta en frío bloques delgados de tejido congelado se llama criótomo . ^{[ 2 ]}

La calidad de las muestras obtenidas mediante biopsia por congelación es inferior a la de las muestras de tejido fijado con formalina e incluido en parafina. Si bien en muchos casos se puede obtener un diagnóstico, en muchas situaciones se prefiere el procesamiento de tejido fijado para obtener un diagnóstico más preciso.

La consulta intraoperatoria es el nombre que recibe la intervención completa del patólogo , que incluye no solo la sección congelada sino también la evaluación macroscópica de la muestra, el examen de preparaciones citológicas tomadas de la muestra (p. ej., improntas) y la alicuotación de la muestra para estudios especiales (p. ej., técnicas de patología molecular, citometría de flujo). El informe del patólogo suele limitarse a un diagnóstico "benigno" o "maligno" y se comunica al cirujano que opera mediante intercomunicador. Cuando se opera sobre una malignidad previamente confirmada, el objetivo principal del patólogo es informar al cirujano si el margen de resección está libre de cáncer residual o si hay cáncer residual en el margen de resección. El método de procesamiento generalmente se realiza con la técnica de panificación . Pero la cirugía con control de márgenes ( CCPDMA ) se puede realizar utilizando una variedad de métodos de corte y montaje de tejido, incluida la cirugía de Mohs .

El procedimiento de sección congelada, tal como se practica hoy en día en los laboratorios médicos, se basa en la descripción de Louis B. Wilson de 1905. Wilson desarrolló la técnica a partir de informes anteriores a petición de William Mayo , cirujano y uno de los fundadores de la Clínica Mayo . ^{[ 3 ]} Informes anteriores de Thomas S. Cullen en el Hospital Johns Hopkins de Baltimore también incluían la sección congelada, pero solo después de la fijación con formalina, y el patólogo William Welch, también en Hopkins, experimentó con el procedimiento de Cullen, pero sin consecuencias clínicas. Por lo tanto, generalmente se le atribuye a Wilson el verdadero desarrollo del procedimiento (Gal y Cagle, 2005). ^{[ 4 ]}

El instrumento clave para la criosección es el criostato , que es esencialmente un micrótomo dentro de un congelador. El micrótomo se puede comparar con una cortadora de fiambres muy precisa, capaz de cortar secciones de tan solo 1 micrómetro de espesor. El corte histológico habitual tiene un espesor de 5 a 10 micrómetros. La muestra quirúrgica se coloca sobre un disco metálico para tejidos, que luego se fija en un mandril y se congela rápidamente a unos -20 a -30  °C. La muestra se coloca en un medio de inclusión en gel, generalmente OCT , que consiste en polietilenglicol y alcohol polivinílico ; este compuesto se conoce con muchos nombres y, una vez congelado, tiene la misma densidad que el tejido congelado. A esta temperatura, la mayoría de los tejidos se vuelven extremadamente duros. Generalmente se requiere una temperatura más baja para tejidos grasos o ricos en lípidos. Cada tejido tiene una temperatura óptima para su procesamiento. Posteriormente, se corta la muestra congelada con el micrótomo del criostato, se coloca la sección en un portaobjetos y se tiñe (generalmente con hematoxilina y eosina , la tinción H&E ). La preparación de la muestra es mucho más rápida que con la técnica histológica tradicional (alrededor de 10 minutos frente a 16 horas). Sin embargo, la calidad técnica de las secciones es mucho menor. El laboratorio completo puede ocupar un espacio de menos de 0,84 m² (9 pies cuadrados ⁾ y requiere una ventilación mínima en comparación con un laboratorio estándar de muestras incluidas en parafina . 

Pasos de la criotomía:

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  Colocar las muestras en uno o más mandriles.
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  Cubrir la muestra con medio de inclusión
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  Aplicar un conductor (a menos que sea una muestra delgada que necesite estar de lado).
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  Si es posible, utilice un spray congelante para acelerar la congelación.
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  Retirar cualquier material de incrustación que llegue por debajo de la placa del mandril.
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  Sujete el mandril al criótomo y corte secciones relativamente gruesas hasta que se expongan todas las superficies de tejido de interés.
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  Desplazar la muestra sobre la cuchilla mientras se sujeta la sección para evitar que se pliegue sobre sí misma.
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  Continúe hasta que todo el tejido de interés esté en la sección.
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  Colocar un portaobjetos de vidrio sobre el tejido.

El principal uso del procedimiento de sección congelada es el examen del tejido durante la cirugía. Esto puede deberse a diversas razones. En la cirugía de Mohs , es un método sencillo para el control de los márgenes en tiempo real de una muestra quirúrgica. Si un tumor parece haber metastatizado , se envía una muestra de la metástasis sospechosa para criosección con el fin de confirmar su identidad. Esto ayudará al cirujano a decidir si tiene sentido continuar la operación. Generalmente, la cirugía agresiva se realiza solo si hay posibilidades de curar al paciente. Si el tumor ha metastatizado, la cirugía generalmente no es curativa y el cirujano optará por una cirugía más conservadora o incluso no realizará ninguna resección. Si se ha resecado un tumor pero no está claro si el margen de resección está libre de tumor, se solicita una consulta intraoperatoria para evaluar la necesidad de realizar una resección adicional para obtener márgenes libres. En un procedimiento de ganglio centinela , un ganglio centinela que contiene tejido tumoral requiere una disección de ganglios linfáticos adicional, mientras que un ganglio benigno evita dicho procedimiento.

Si la cirugía es exploratoria, un examen rápido de la lesión podría ayudar a identificar la posible causa de los síntomas del paciente. El patólogo se ve limitado por la baja calidad técnica de las muestras congeladas. Rara vez se ofrece un diagnóstico definitivo durante la intervención.

En raras ocasiones, las criosecciones se utilizan para detectar la presencia de sustancias que se pierden con la técnica histológica tradicional, como los lípidos. También pueden utilizarse para detectar algunos antígenos enmascarados por el formaldehído. El criostato está disponible en modelos portátiles pequeños que pesan menos de 36 kg (80 lb) y en equipos fijos de gran tamaño que pesan 230 kg (500 lb) o más. Todo el laboratorio histológico puede transportarse en una sola caja portátil, lo que convierte a la histología por congelación en una herramienta viable en la medicina tradicional.    

Una revisión sistemática de Cochrane publicada en 2016 analizó todos los estudios que informaron sobre la precisión diagnóstica de las secciones congeladas en mujeres sometidas a cirugía por tumores sospechosos de ovario. La revisión concluyó que, para los tumores que eran claramente benignos o malignos en la sección congelada, la precisión del diagnóstico era buena, como se confirmó posteriormente mediante biopsia convencional. Por el contrario, cuando el diagnóstico de la sección congelada era un tumor limítrofe, que no confirmaba ni descartaba el cáncer, el diagnóstico era menos preciso. La revisión sugiere que, en tales situaciones de incertidumbre, los cirujanos podrían optar por realizar una cirugía adicional en este grupo de mujeres al mismo tiempo que la cirugía inicial para reducir la necesidad de una segunda intervención, ya que, en promedio, a una de cada cinco de estas mujeres se les diagnosticó cáncer posteriormente. ^{[ 5 ]}

Un ultracriótomo , un dispositivo muy similar al critótomo, permite cortar bloques de tejido ultrafinos, los cuales pueden observarse mediante microscopía electrónica de transmisión . El grosor de corte del ultracriótomo es de aproximadamente decenas de nanómetros. Las propiedades ultraestructurales pueden estudiarse sin necesidad de incluir el tejido en parafina, lo que mejora la conservación molecular. ^{[ 6 ]}

• matriz de tejido congelado

• Página de JAMA para pacientes sobre el procedimiento de biopsia por congelación