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La dietilaminoetilcelulosa ( DEAE-C ) es una resina con carga positiva que se utiliza en cromatografía de intercambio iónico , un tipo de cromatografía en columna , para la separación y purificación de proteínas y ácidos nucleicos. Las microesferas de matriz de gel se derivatizan con dietilaminoetanol (DEAE) y retienen proteínas o ácidos nucleicos con carga negativa en la matriz. Las proteínas se liberan de la resina aumentando la concentración de sal del disolvente o modificando el pH de la solución para cambiar la carga de la proteína.
Preparación
El DEAE-C se sintetiza mediante una reacción catalizada por álcalis de celulosa (obtenida de tejido de algodón ) con 2-clorotrietilamina, ilustrada a continuación : [ 1 ]
Tipos
resinas comunes
El DEAE-C se encuentra comúnmente disponible comercialmente como DE52 y DE53. [ 2 ] Estas resinas se preparan prehinchadas [ 3 ] aunque los intercambiadores de celulosa se hinchan en un entorno fuertemente básico para aumentar el acceso a los sitios de unión. [ 4 ]
DE52 tiene un pKa de 11,5. El rango de amortiguación para la dietanolamina es de 8,4 a 8,8, aunque el rango para DEAE-C varía entre fabricantes. [ 5 ]
DEAE-D
El DEAE - Dextrano (DEAE-D) es un derivado de dextrano con carga positiva que se puede utilizar para la producción de vacunas , terapia génica , estabilización de proteínas, prevención de la dislipidemia , agentes floculantes y muchas otras aplicaciones. [ 6 ] El DEAE-D también se utiliza para transfectar células animales con ADN extraño. Se añade a una solución que contiene el ADN destinado a la transfección. Se une e interactúa con las moléculas de ADN con carga negativa y, mediante un mecanismo desconocido, provoca la captación de ácidos nucleicos por la célula. Este procedimiento es muy adecuado para la transfección transitoria utilizada en diversos estudios de biología molecular . [ 7 ]
Otros derivados
La DEAE-Sepharose , la DEAE-650 y la DEAE- Sephadex se utilizan habitualmente en cromatografía.
Cromatografía de intercambio iónico
La DEAE-C es un intercambiador aniónico débil. Este intercambio se utiliza para separar proteínas con cargas ligeramente diferentes. Al igual que todos los intercambiadores aniónicos, la resina posee una carga positiva que interactúa favorablemente con las cargas negativas. La carga positiva de la celulosa DEAE se debe a un grupo amino protonado. Para asegurar que la resina esté protonada y cargada positivamente, la cromatografía debe realizarse al menos 2 unidades de pH por debajo del pKa del grupo amino, 10. La fuerza del enlace entre la resina y la proteína depende en gran medida del rango de pH en la columna y del pI de la proteína de interés. La resina es un intercambiador débil porque solo se ioniza parcialmente en la mayoría de los valores de pH, y una separación eficiente con cromatografía de DEAE-C requiere un rango de pH específico y estrecho. [ 8 ]
La celulosa, el dextrano, la agarosa y otros complejos insolubles no se ven afectados porque componen matrices inertes, de ahí que se deriven con frecuencia con intercambiadores de cationes y aniones fuertes y débiles en cromatografía. Las perlas de DEAE-C tienen cadenas de dietilaminoetilo unidas covalentemente a átomos de oxígeno en las subunidades de D-glucosa de la celulosa .
Véase también
Referencias
- ↑ Rousseau, Ronald W.; Ferrell, James K.; Reardon, Robert F. (1984-06-01). "Síntesis de dietilaminoetilcelulosa en tejido de algodón". Industrial & Engineering Chemistry Product Research and Development . 23 (2): 250– 252. doi : 10.1021/i300014a015 . ISSN 0196-4321 .
- ↑ "Whatman® celulosa de intercambio aniónico DE52" . Sigma-Aldrich . Consultado el 11 de mayo de 2016 .
- ↑ Reuveny, S.; Silberstein, L.; Shahar, A.; Freeman, E.; Mizrahi, A. (febrero de 1982). "Microportadores de celulosa DE-52 y DE-53: I. Crecimiento de células primarias y establecidas dependientes de anclaje". In Vitro . 18 (2): 92– 98. JSTOR 20170418 .
- ↑ Peterson, Elbert A.; Sober, Herbert A. (1956). "Cromatografía de proteínas. I. Adsorbentes de intercambio iónico de celulosa". Journal of the American Chemical Society . 78 (4): 751– 755. doi : 10.1021/ja01585a016 . ISSN 0002-7863 .
- ↑ "Manual de instrucciones de los geles de intercambio iónico DEAE y CM Bio-Gel ® A" (PDF) . Bio-Rad . Consultado el 11 de mayo de 2016 .
- ↑ "DEAE-Dextrano" (PDF) . GE Life Sciences . Amersham Biosciences. Archivado del original (PDF) el 11 de junio de 2016. Consultado el 11 de mayo de 2016 .
- ↑ Gulick, Tod (2003). "Transfección usando DEAE-Dextrano". Current Protocols in Cell Biology . 19 : 20.4.1–20.4.10. doi : 10.1002/0471143030.cb2004s19 . PMID 18228428 .
- ↑ Ninfa, Alexander (2010). Enfoques fundamentales de laboratorio para la bioquímica y la biotecnología . Hoboken, NJ: John Wiley. ISBN 978-0-470-08766-4.
- Éteres de celulosa