Prueba de Coombs

Las pruebas de Coombs directa e indirecta , también conocidas como prueba de antiglobulina ( PAG ), son análisis de sangre utilizados en inmunohematología . La prueba de Coombs directa detecta anticuerpos adheridos a la superficie de los glóbulos rojos. ^{[ 1 ]} Dado que estos anticuerpos a veces destruyen los glóbulos rojos, pueden causar anemia ; esta prueba puede ayudar a esclarecer la afección. La prueba de Coombs indirecta detecta anticuerpos que circulan libremente en la sangre. ^{[ 1 ]} Estos anticuerpos podrían actuar contra ciertos glóbulos rojos; la prueba se puede realizar para diagnosticar reacciones a una transfusión de sangre . ^{[ 1 ]}

La prueba de Coombs directa se utiliza para detectar la anemia hemolítica autoinmune , una afección en la que el sistema inmunitario destruye los glóbulos rojos , lo que provoca anemia. Detecta anticuerpos o proteínas del complemento adheridos a la superficie de los glóbulos rojos. Para realizar la prueba, se toma una muestra de sangre y se lavan los glóbulos rojos (eliminando el plasma del paciente y los anticuerpos no unidos a los glóbulos rojos). Posteriormente, se incuban con globulina antihumana ("reactivo de Coombs"). Si los glóbulos rojos se aglutinan , la prueba es positiva, lo que indica visualmente que hay anticuerpos o proteínas del complemento adheridos a la superficie de los glóbulos rojos y que podrían estar causando su destrucción.

La prueba de Coombs indirecta se utiliza en el control prenatal de mujeres embarazadas y en las pruebas previas a una transfusión sanguínea. Esta prueba detecta anticuerpos contra glóbulos rojos extraños. Para ello, se extrae suero de una muestra de sangre del paciente. El suero se incuba con glóbulos rojos extraños de antigenicidad conocida . Finalmente, se añade antiglobulina humana. Si se produce aglutinación, la prueba de Coombs indirecta es positiva. ^{[ 2 ]}

Las dos pruebas de Coombs se basan en la unión de anticuerpos antihumanos a anticuerpos humanos, comúnmente IgG o IgM . Estos anticuerpos antihumanos son producidos por células plasmáticas de animales no humanos tras su inmunización con plasma humano . Además, estos anticuerpos antihumanos también se unen a anticuerpos humanos que pueden estar fijados a antígenos en la superficie de los glóbulos rojos . En las condiciones adecuadas del tubo de ensayo, esto puede provocar la aglutinación de los glóbulos rojos y permitir la visualización de los cúmulos resultantes. Si se observa aglutinación, la prueba de Coombs es positiva; de lo contrario, es negativa. ^{[ 3 ]}

Los usos clínicos comunes de la prueba de Coombs incluyen la preparación de sangre para transfusión en pruebas de compatibilidad cruzada , la detección de anticuerpos atípicos en el plasma sanguíneo de mujeres embarazadas como parte de la atención prenatal y la detección de anticuerpos para el diagnóstico de anemias hemolíticas inmunomediadas . ^{[ 4 ]}

Las pruebas de Coombs se realizan utilizando glóbulos rojos o suero (directo o indirecto, respectivamente) de muestras de sangre venosa total extraídas de los pacientes mediante venopunción . La sangre venosa se lleva a un laboratorio (o banco de sangre), donde personal técnico científico capacitado realiza las pruebas de Coombs. La relevancia clínica del resultado la evalúa el médico que solicitó la prueba de Coombs, posiblemente con la ayuda de un hematólogo del laboratorio .

La prueba de Coombs directa, también conocida como prueba de antiglobulina directa (PAD), se utiliza para detectar si los anticuerpos o los factores del sistema del complemento se han unido a los antígenos de la superficie de los glóbulos rojos . ^{[ 5 ]} La PAD no es obligatoria para las pruebas pretransfusionales ^{[ 6 ]} pero algunos laboratorios pueden realizarla. Antes de la transfusión, a menudo se realiza una prueba de Coombs indirecta .

Usos

La prueba de Coombs directa se utiliza clínicamente cuando se sospecha anemia hemolítica inmunomediada (destrucción de glóbulos rojos mediada por anticuerpos). Una prueba de Coombs positiva indica que un mecanismo inmunitario está atacando los glóbulos rojos del paciente . Este mecanismo podría ser autoinmunidad , aloinmunidad o un mecanismo inmunomediado inducido por fármacos. ^{[ 3 ]}

Ejemplos de hemólisis aloinmune

• Enfermedad hemolítica del recién nacido (también conocida como EHRN o eritroblastosis fetal)
  • Enfermedad hemolítica del recién nacido por factor Rh D (también conocida como enfermedad Rh)
  • Enfermedad hemolítica neonatal por síndrome ABO (la prueba de Coombs directa puede dar un resultado débilmente positivo).
  • Enfermedad hemolítica anti-Kell del recién nacido
  • Enfermedad hemolítica del recién nacido por Rh c
  • Enfermedad hemolítica del recién nacido por factor Rh E
  • Otras incompatibilidades de grupos sanguíneos (RhC, Rh, Kidd, Duffy, Lewis, MN, P y otros)
• Reacciones hemolíticas transfusionales aloinmunes

Ejemplos de hemólisis autoinmune/hemólisis inmunohemolítica

• anemia hemolítica autoinmune por anticuerpos calientes
  • Idiopático
  • lupus eritematoso sistémico
  • Síndrome de Evans (anticuerpos antiplaquetarios y anticuerpos hemolíticos)
• anemia inmunohemolítica por anticuerpos fríos
  • Síndrome idiopático de criohemaglutinina
  • Macroglobulinemia de Waldenström
  • mononucleosis infecciosa
  • Hemoglobinuria paroxística por frío (rara)

Hemólisis inmunomediada inducida por fármacos

• Metildopa (hipersensibilidad tipo II mediada por IgG)
• Penicilina (dosis alta)
• Quinidina (activación mediada por IgM de la vía clásica del complemento y del complejo de ataque a la membrana, MAC)

(Un recurso mnemotécnico para recordar que la prueba DAT analiza los glóbulos rojos y se utiliza para detectar la enfermedad hemolítica del recién nacido en lactantes es: R h Enfermedad ; R = glóbulos rojos, D = DAT.)

La prueba de Coombs indirecta, también conocida como prueba de antiglobulina indirecta (PAI), se utiliza para detectar reacciones antígeno-anticuerpo in vitro . Permite detectar concentraciones muy bajas de anticuerpos en el plasma o suero del paciente antes de una transfusión sanguínea. En la atención prenatal, la PAI se utiliza para detectar anticuerpos que puedan causar enfermedad hemolítica del recién nacido en mujeres embarazadas . La PAI también puede utilizarse para pruebas de compatibilidad , identificación de anticuerpos, fenotipificación de glóbulos rojos y estudios de titulación.

El reactivo de Coombs (también conocido como antiglobulina de Coombs o antiglobulina humana ) se utiliza tanto en la prueba de Coombs directa como en la indirecta. Su producción consiste en inyectar globulina humana en animales, que posteriormente producen anticuerpos policlonales específicos para las inmunoglobulinas humanas y los factores del sistema del complemento humano. También se pueden utilizar reactivos de Coombs más específicos o anticuerpos monoclonales .

Los anticuerpos IgM e IgG se unen fuertemente a sus antígenos complementarios. Los anticuerpos IgG son más reactivos a 37 °C. Los anticuerpos IgM se detectan fácilmente en solución salina a temperatura ambiente, ya que, debido a su gran tamaño, pueden formar puentes entre los glóbulos rojos, creando eficientemente lo que se observa como aglutinación . Los anticuerpos IgG son más pequeños y requieren ayuda para formar puentes lo suficientemente fuertes como para producir una reacción de aglutinación visible . Los reactivos utilizados para mejorar la detección de IgG se denominan potenciadores. Los glóbulos rojos tienen una carga negativa neta llamada potencial zeta, lo que provoca que tengan una repulsión natural entre sí. Los potenciadores reducen el potencial zeta de las membranas de los glóbulos rojos. Los potenciadores comunes incluyen la solución de baja fuerza iónica (LISS), la albúmina , el polietilenglicol (PEG) y las enzimas proteolíticas . 

La prueba de Coombs fue descrita por primera vez en 1945 por los inmunólogos de Cambridge Robin Coombs (de quien recibe su nombre), Arthur Mourant y Rob Race . ^{[ 8 ]} Históricamente, se realizaba en tubos de ensayo . Hoy en día, se suele realizar mediante tecnología automatizada de fase sólida o gel.

• Prueba de Coombs - Medlineplus.org.
• Fármacos que provocan anemia hemolítica - Manual Merck.
• Prueba de Coombs en los Encabezamientos de Materias Médicas (MeSH) de la Biblioteca Nacional de Medicina de EE. UU.