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EHA101

EHA101 fue uno de los primeros y más utilizados plásmidos auxiliares de Agrobacterium para la transferencia de genes en plantas. Creado en 1985 en el laboratorio de Mary-Dell Ch...

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EHA101 fue uno de los primeros y más utilizados plásmidos auxiliares de Agrobacterium para la transferencia de genes en plantas. Creado en 1985 en el laboratorio de Mary-Dell Chilton en la Universidad de Washington en St. Louis , recibió su nombre en honor a la estudiante de posgrado que lo construyó. EH significa "Elizabeth Hood" y A significa " Agrobacterium ". La cepa auxiliar EHA101 es un derivado de A281, la cepa hipervirulenta de A. tumefaciens que causa tumores grandes y de rápido crecimiento en plantas solanáceas . [ 1 ] [ 2 ] Esta cepa se utiliza para transferir genes de interés a cientos de especies de plantas en todo el mundo.

Para cultivos recalcitrantes como el maíz , el trigo y el arroz , las cepas auxiliares EHA se emplean a menudo para la transferencia de genes. [ 3 ] [ 4 ] [ 5 ] Estas cepas son eficientes para promover la transferencia de T-DNA debido a la hipervirulencia de los genes vir [ 2 ] lo que sugiere que se puede lograr una tasa de éxito mayor en estos cultivos o cultivares "difíciles de transformar" .

El fondo cromosómico de EHA101 es C58C1, una cepa nopalina curada . [ 1 ] Las cepas auxiliares se derivaron de A281, que es A136(pTiBo542). A281 fue modificada genéticamente mediante un doble entrecruzamiento y una deleción dirigida al sitio para producir EHA101, una cepa con deleción de T-DNA útil para la transferencia de genes diana a plantas. [ 2 ] EHA101 es resistente a la kanamicina mediante un gen npt I en lugar de T-DNA. La cepa parental, A281, no muestra resistencias a antibióticos en niveles superiores a los de las cepas normales de A. tumefaciens . Además, otras cepas transconjugantes en el fondo C58C1 no muestran estas resistencias aumentadas a los antibióticos. Por lo tanto, estas características no son simplemente una manifestación del fondo cromosómico, sino muy probablemente una interacción de este plásmido Ti y el fondo cromosómico C58.

El gen npt I en lugar del T-DNA en EHA101 requiere que los plásmidos binarios que se insertan en la cepa codifiquen una resistencia a un fármaco distinto de la kanamicina. La cepa EHA105 se generó a partir de EHA101 mediante la deleción dirigida del gen de resistencia a la kanamicina del plásmido Ti; por lo demás, las cepas son idénticas. [ 6 ] Esta última cepa ha sido útil para los biotecnólogos de plantas que utilizan la kanamicina como marcador de selección en sus plásmidos binarios.

Referencias

  1. 1 2 Sciaky, D.; Montoya, AL y Chilton, M.-D. (1991). "Una biblioteca genómica de Arabidopsis competente para la transformación de ADN en Agrobacterium". Nature Biotechnology . 9 (10): 963– 967. doi : 10.1038/nbt1091-963 . PMID 1368724 . S2CID 205272224 .  
  2. 1 2 3 Hood, EE; Helmer, GL; Fraley, RT y Chilton, MD (1986). "La hipervirulencia de Agrobacterium tumefaciens A281 está codificada en una región de pTiBo542 fuera del T=ADN" . Journal of Bacteriology . 168 (3): 1291– 1301. doi : 10.1128/jb.168.3.1291-1301.1986 . PMC 213636. PMID 3782037 .  
  3. ↑ Hiei, Y.; Ohta, S.; Komari, T. y Kumashiro, T. (1994). "Transformación eficiente del arroz (Oryza sativa L.) mediada por Agrobacerium y análisis de secuencia de los límites del T-DNA" . The Plant Journal . 6 (2): 271– 282. doi : 10.1046/j.1365-313x.1994.6020271.x . PMID 7920717 . 
  4. ^ Ishida, Y.; Saito, H.; Ohta, S.; Hiei, Y.; Komari, T. y Kumashiro, T. (1996). "Transformación de alta eficiencia de maíz (Zea mays L.) mediada por Agrobacterium tumefaciens". Biotecnología de la Naturaleza . 14 (6): 745– 750. doi : 10.1038/nbt0696-745 . PMID 9630983 . S2CID 21631342 .  
  5. ↑ Frame, BR; Shou, H.; Chikwamba, RK; Zhang, Z.; Xiang, C.; Fonger, TM; Pegg, SEK; Li, B.; Nettleton, DS y Pei, D. (2002). "Transformación de embriones de maíz mediada por Agrobacterium tumefaciens utilizando un sistema de vector binario estándar" . Plant Physiology . 129 (1): 13– 22. doi : 10.1104/pp.000653 . PMC 1540222. PMID 12011333 .  
  6. ↑ Hood, EE; Gelvin, SB; Melchers, LS y Hoekema, A. (1993). "Nuevos plásmidos auxiliares de Agrobacterium para la transferencia de genes a plantas". Transgenic Research . 2 (4): 208– 218. doi : 10.1007/BF01977351 . S2CID 23507928 .