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La electrotransferencia es un método en biología molecular / bioquímica / inmunogenética para transferir proteínas o ácidos nucleicos a una membrana mediante el uso de PVDF o nitrocelulosa , después de la electroforesis en gel . [2] [3] La proteína o el ácido nucleico se pueden analizar más a fondo utilizando sondas como anticuerpos específicos , ligandos como lectinas o colorantes. Este método se puede utilizar con todos los geles de poliacrilamida y agarosa. Una técnica alternativa para transferir proteínas desde un gel es la transferencia capilar.
Desarrollo
Esta técnica fue patentada en 1989 por William J. Littlehales bajo el título "Técnica de electroborrado para transferir muestras desde un gel de electroforesis de poliacrilamida o similar a una membrana". [1] [4]
Procedimiento de electrotransferencia
Esta técnica se basa en la corriente y una solución tampón de transferencia para conducir las proteínas o los ácidos nucleicos hacia una membrana. Después de la electroforesis, se instala un tanque estándar o un sistema de transferencia de transferencia semiseco. Se arma una pila en el siguiente orden desde el cátodo hasta el ánodo: esponja | tres hojas de papel de filtro empapadas en tampón de transferencia | gel | membrana de PVDF o nitrocelulosa | tres hojas de papel de filtro empapadas en tampón de transferencia | esponja. Es necesario que la membrana esté ubicada entre el gel y el ánodo con carga positiva, ya que la corriente y la muestra se moverán en esa dirección. Una vez preparada la pila, se coloca en el sistema de transferencia y se aplica una corriente de magnitud adecuada durante un período de tiempo adecuado según los materiales que se utilicen.
Normalmente, el gel de electroforesis se tiñe con azul brillante de Coomassie después de la transferencia para garantizar que se haya transferido una cantidad suficiente de material. Debido a que las proteínas pueden conservar o recuperar parte de su estructura durante la transferencia, pueden reaccionar con anticuerpos específicos, lo que da lugar al término inmunotransferencia . Alternativamente, las proteínas pueden reaccionar con ligandos como las lectinas, lo que da lugar al término transferencia de afinidad .
Véase también
Referencias
- ^ de RC Dubey (2014). Biotecnología avanzada. S. Chand Publishing. pp. 199–. ISBN 978-81-219-4290-4.
- ^ David Sheehan (30 de abril de 2013). Bioquímica física: principios y aplicaciones. John Wiley & Sons. pp. 206–. ISBN 978-1-118-68748-2.
- ^ MP Bansal (1 de enero de 2013). Biología molecular y biotecnología: protocolos experimentales básicos. Instituto de Energía y Recursos (TERI). pp. 141–. ISBN 978-81-7993-379-4.
- ^ "Patente de los Estados Unidos 4840714". Archivado desde el original el 29 de septiembre de 2007. Consultado el 24 de mayo de 2007 .
Enlaces externos
- Transferencia de proteínas (Western): introducción a la transferencia de membrana de anticuerpos
- Procedimiento detallado de electrotransferencia a PVDF - Laboratorio de Química de Proteínas