Hispanopedia WikiEl término reactivación de la célula huésped o HCR se utilizó por primera vez para describir la supervivencia de bacteriófagos irradiados con UV , que se transfectaron en células pretratadas con UV. [ 1 ] Inicialmente se pensó que este fenómeno era el resultado de la recombinación homóloga entre bacterias y fagos, pero posteriormente se reconoció como reparación enzimática. [ 2 ] [ 3 ] [ 4 ] Posteriormente se desarrollaron modificaciones del ensayo, utilizando vectores de ADN plasmídico de expresión transitoria en fibroblastos inmortalizados , [ 5 ] y más recientemente en linfocitos humanos . [ 6 ]
El ensayo HCR, también conocido como ensayo de reactivación de plásmidos, monitoriza indirectamente el sistema de reparación transcripcional celular, que se activa por el daño transcripcional inhibido por la radiación UV en el plásmido . Dado que el daño al ADN inducido por UV se utiliza como mutágeno , la célula utiliza la vía de reparación por escisión de nucleótidos (NER) , que se activa por la distorsión en la hélice del ADN. [ 1 ]
El ensayo de reactivación de células huésped ( HCR) es una técnica utilizada para medir la capacidad de reparación del ADN de una célula ante una alteración específica del ADN. En el ensayo HCR se mide la capacidad de una célula intacta para reparar ADN exógeno [ 7 ]. La célula huésped se transfecta con un plásmido dañado que contiene un gen reportero , generalmente luciferasa , que ha sido desactivado debido al daño. La capacidad de la célula para reparar el daño en el plásmido, después de su introducción, permite la reactivación del gen reportero. Las versiones anteriores de este ensayo se basaban en el gen de la cloranfenicol acetiltransferasa (CAT) [ 5 ] , pero la versión del ensayo que utiliza luciferasa como gen reportero es hasta 100 veces más sensible [ 1 ] .
Véase también
Referencias
- 1 2 3 Johnson JM, Latimer JJ (2005). "Análisis de la reparación del ADN mediante la reactivación de células huésped basada en la transfección". Molecular Toxicology Protocols . Methods Mol. Biol. Vol. 291. pp. 321–35 . doi : 10.1385/1-59259-840-4:321 . ISBN 1-59259-840-4. PMC 4860737 . PMID 15502233 .
- ↑ Rupert CS, Harm W (1966). "Reactivación tras daño fotobiológico". Adv. Radiat. Biol . Avances en biología de la radiación. 2 : 1–81 . doi : 10.1016/B978-1-4832-3121-1.50006-2 . ISBN 9781483231211ISSN 0065-3292
- ↑ Smith KC, Martignoni KD (diciembre de 1976). "Protección de células de Escherichia coli contra los efectos letales de la irradiación ultravioleta y x mediante irradiación x previa: un estudio genético y fisiológico". Photochem . Photobiol . 24 (6): 515– 23. doi : 10.1111/j.1751-1097.1976.tb06868.x . PMID 798210. S2CID 37612164 .
- ↑ Jones DT, Robb FT, Woods DR (diciembre de 1980). "Efecto del oxígeno en la supervivencia de Bacteroides fragilis después de la irradiación con luz ultravioleta lejana" . J. Bacteriol . 144 (3): 1179–81 . doi : 10.1128/JB.144.3.1179-1181.1980 . PMC 294787. PMID 7440505 .
- 1 2 Protić-Sabljić M, Kraemer KH (octubre de 1985). "Un dímero de pirimidina inactiva la expresión de un gen transfectado en células de xeroderma pigmentoso" . Proc . Natl. Acad. Sci. USA . 82 (19): 6622– 6. Bibcode : 1985PNAS...82.6622P . doi : 10.1073/pnas.82.19.6622 . PMC 391262. PMID 2995975 .
- ↑ Athas WF, Hedayati MA, Matanoski GM, Farmer ER, Grossman L (noviembre de 1991). "Desarrollo y validación en campo de un ensayo para la reparación del ADN en linfocitos humanos circulantes". Cancer Res . 51 (21): 5786–93 . PMID 1933849 .
- ↑ McCready, S. (2014). Un inmunoensayo para medir la reparación del ADN. En P. Keohavong y SG Grant (Eds.), Protocolos de toxicología molecular (Vol. 1105, pp. 551–564). Humana Press. doi : 10.1007/978-1-62703-739-6_38
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