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Cromatografía de afinidad

La cromatografía de afinidad es un método para separar una biomolécula de una mezcla, basado en una interacción de unión macromolecular altamente específica entre la biomolécula...

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La cromatografía de afinidad es un método para separar una biomolécula de una mezcla, basado en una interacción de unión macromolecular altamente específica entre la biomolécula y otra sustancia. El tipo específico de interacción de unión depende de la biomolécula de interés; las interacciones de unión antígeno - anticuerpo , enzima - sustrato , receptor - ligando , o proteína - ácido nucleico [ 1 ] se utilizan frecuentemente para el aislamiento de diversas biomoléculas. La cromatografía de afinidad es útil por su alta selectividad y resolución de separación, [ 2 ] [ 3 ] en comparación con otros métodos cromatográficos.

Principio

La cromatografía de afinidad tiene la ventaja de las interacciones de unión específicas entre el analito de interés (normalmente disuelto en la fase móvil ) y un ligando o socio de unión (inmovilizado en la fase estacionaria ). En un experimento típico de cromatografía de afinidad, el ligando se une a una matriz sólida e insoluble —generalmente un polímero como la agarosa o la poliacrilamida— modificada químicamente para introducir grupos funcionales reactivos con los que el ligando puede reaccionar, formando enlaces covalentes estables. [ 4 ] La fase estacionaria se carga primero en una columna a la que se introduce la fase móvil. Las moléculas que se unen al ligando permanecerán asociadas a la fase estacionaria. A continuación, se aplica un tampón de lavado para eliminar las biomoléculas no objetivo interrumpiendo sus interacciones más débiles con la fase estacionaria, mientras que las biomoléculas de interés permanecerán unidas. Las biomoléculas objetivo pueden eliminarse posteriormente aplicando un tampón de elución, que interrumpe las interacciones entre las biomoléculas objetivo unidas y el ligando. De este modo, la molécula objetivo se recupera en la solución de elución. [ 5 ]

La cromatografía de afinidad no requiere conocer el peso molecular, la carga, la hidrofobicidad ni otras propiedades físicas del analito de interés, aunque el conocimiento de sus propiedades de unión resulta útil para el diseño de un protocolo de separación. [ 5 ] Los tipos de interacciones de unión comúnmente utilizadas en los procedimientos de cromatografía de afinidad se resumen en la tabla siguiente.

Configuraciones por lotes y columnas

Principio de la cromatografía de columna de afinidad
Cromatografía por lotes

La unión a la fase sólida puede lograrse mediante cromatografía en columna, donde el medio sólido se empaqueta en una columna, la mezcla inicial se hace pasar a través de ella para permitir la sedimentación, se hace pasar un tampón de lavado a través de la columna y, posteriormente, se aplica el tampón de elución a la columna y se recoge. Estos pasos generalmente se realizan a presión ambiente. Alternativamente, la unión puede lograrse mediante un tratamiento por lotes, por ejemplo, añadiendo la mezcla inicial a la fase sólida en un recipiente, mezclando, separando la fase sólida, eliminando la fase líquida, lavando, centrifugando de nuevo, añadiendo el tampón de elución, centrifugando de nuevo y eliminando el eluido.

En ocasiones se emplea un método híbrido en el que la unión se realiza mediante el método por lotes, pero la fase sólida con la molécula objetivo unida se empaqueta en una columna y el lavado y la elución se realizan en la columna.

Los ligandos utilizados en cromatografía de afinidad se obtienen de fuentes tanto orgánicas como inorgánicas. Ejemplos de fuentes biológicas son las proteínas séricas, las lectinas y los anticuerpos. Las fuentes inorgánicas son el ácido morónico, los quelatos metálicos y los colorantes de triazina. [ 7 ]

También se ha desarrollado un tercer método, la absorción en lecho expandido, que combina las ventajas de los dos métodos mencionados anteriormente. Las partículas de la fase sólida se colocan en una columna donde se bombea la fase líquida desde la parte inferior y sale por la parte superior. La gravedad de las partículas garantiza que la fase sólida no salga de la columna junto con la fase líquida.

Las columnas de afinidad pueden eluirse cambiando las concentraciones de sal, el pH, el pI, la carga y la fuerza iónica directamente o mediante un gradiente para separar las partículas de interés.

Más recientemente, se han desarrollado configuraciones que emplean más de una columna en serie. La ventaja en comparación con las configuraciones de una sola columna es que el material de resina se puede cargar completamente, ya que el producto no ligado pasa directamente a una columna consecutiva con material de columna nuevo. Estos procesos cromatográficos se conocen como cromatografía contracorriente periódica (PCC). De este modo, los costos de resina por cantidad de producto producido se pueden reducir drásticamente. Dado que una columna siempre se puede eluir y regenerar mientras se carga la otra, dos columnas son suficientes para aprovechar al máximo las ventajas. [ 8 ] Las columnas adicionales pueden brindar mayor flexibilidad en los tiempos de elución y regeneración, a costa de costos adicionales de equipo y resina.

Usos específicos

La cromatografía de afinidad se puede utilizar en una serie de aplicaciones, incluyendo la purificación de ácidos nucleicos, la purificación de proteínas [ 9 ] a partir de extractos libres de células y la purificación a partir de sangre.

Mediante cromatografía de afinidad, se pueden separar las proteínas que se unen a un fragmento determinado de las que no se unen a dicho fragmento. [ 10 ] Dado que esta técnica de purificación se basa en las propiedades biológicas de la proteína necesaria, resulta útil y permite purificar proteínas en gran medida en un solo paso. [ 11 ]

Diversos medios de afinidad

Existen muchos medios de afinidad diferentes para una variedad de posibles usos. [ 12 ] [ 9 ] [ 13 ] En resumen, son (generalizados) activados/funcionalizados que funcionan como un espaciador funcional, matriz de soporte y eliminan la manipulación de reactivos tóxicos.

Los medios de cultivo de aminoácidos se utilizan con diversas proteínas séricas, proteínas, péptidos y enzimas, así como con ARNr y ADN bicatenario. Los medios de cultivo de avidina-biotina se utilizan en el proceso de purificación de biotina/avidina y sus derivados.

La unión de carbohidratos se utiliza con mayor frecuencia con glicoproteínas o cualquier otra sustancia que contenga carbohidratos; los carbohidratos se utilizan con lectinas, glicoproteínas o cualquier otra proteína metabolito de carbohidratos. Los medios de unión con ligandos de colorante no son específicos, pero imitan sustratos biológicos y proteínas. El glutatión es útil para la separación de proteínas recombinantes marcadas con GST. La heparina es un ligando de afinidad generalizado y es muy útil para la separación de proteínas de coagulación plasmática, junto con enzimas de ácidos nucleicos y lipasas.

Los medios de interacción hidrofóbica se utilizan con mayor frecuencia para atacar grupos carboxilo libres y proteínas.

Los medios de inmunoafinidad (que se detallan a continuación) utilizan la alta especificidad de los antígenos y los anticuerpos para separarlos; la cromatografía de afinidad de metales inmovilizados se detalla más adelante y utiliza las interacciones entre iones metálicos y proteínas (generalmente marcadas especialmente) para separarlos; nucleótido/coenzima que funciona para separar deshidrogenasas, quinasas y transaminasas.

Los ácidos nucleicos sirven para atrapar el ARNm, el ADN, el ARNr y otros ácidos nucleicos/oligonucleótidos. El método de proteína A/G se utiliza para purificar las inmunoglobulinas.

Los medios de cultivo especializados están diseñados para una clase o tipo específico de proteína o coenzima; este tipo de medio solo sirve para separar una proteína o coenzima específica.

Inmunoafinidad

Otro uso de este procedimiento es la purificación por afinidad de anticuerpos a partir de suero sanguíneo. Si se sabe que el suero contiene anticuerpos contra un antígeno específico (por ejemplo, si proviene de un organismo inmunizado contra dicho antígeno), puede utilizarse para la purificación por afinidad de ese antígeno. Esto también se conoce como cromatografía de inmunoafinidad. Por ejemplo, si un organismo se inmuniza contra una proteína de fusión GST, producirá anticuerpos contra la proteína de fusión y, posiblemente, también contra la etiqueta GST. La proteína puede entonces unirse covalentemente a un soporte sólido, como la agarosa, y utilizarse como ligando de afinidad en la purificación de anticuerpos a partir de suero inmune.

Para mayor precisión, la proteína GST y la proteína de fusión GST pueden acoplarse por separado. Inicialmente, se permite que el suero se una a la matriz de afinidad GST. Esto eliminará los anticuerpos contra la parte GST de la proteína de fusión. A continuación, el suero se separa del soporte sólido y se deja que se una a la matriz de la proteína de fusión GST. Esto permite que cualquier anticuerpo que reconozca el antígeno quede capturado en el soporte sólido. La elución de los anticuerpos de interés se suele lograr utilizando un tampón de pH bajo , como glicina pH 2,8. El eluato se recoge en un tampón de fosfato o tris neutro para neutralizar el tampón de elución de pH bajo y detener cualquier degradación de la actividad del anticuerpo. Este es un buen ejemplo, ya que la purificación por afinidad se utiliza para purificar la proteína de fusión GST inicial, eliminar los anticuerpos anti-GST no deseados del suero y purificar el anticuerpo objetivo.

También se pueden seleccionar anticuerpos monoclonales para que se unan a proteínas con gran especificidad, donde la proteína se libera en condiciones relativamente suaves. Esto puede resultar útil para futuras investigaciones. [ 14 ]

Se suele emplear una estrategia simplificada para purificar anticuerpos generados contra antígenos peptídicos . Cuando los antígenos peptídicos se sintetizan, se añade un residuo de cisteína terminal en el extremo N o C del péptido. Este residuo de cisteína contiene un grupo funcional sulfhidrilo que permite que el péptido se conjugue fácilmente a una proteína portadora (por ejemplo, hemocianina de lapa (KLH)). El mismo péptido con cisteína se inmoviliza en una resina de agarosa a través del residuo de cisteína y se utiliza posteriormente para purificar el anticuerpo.

La mayoría de los anticuerpos monoclonales se han purificado utilizando cromatografía de afinidad basada en la proteína A o la proteína G específicas de inmunoglobulina , derivadas de bacterias. [ 15 ]

La cromatografía de inmunoafinidad con anticuerpos monoclonales inmovilizados en una columna monolítica se ha utilizado con éxito para capturar vesículas extracelulares (por ejemplo, exosomas y exómeros) del plasma sanguíneo humano mediante la detección de tetraspaninas e integrinas presentes en la superficie de las VE. [ 16 ] [ 17 ]

La cromatografía de inmunoafinidad también constituye la base de las tiras de prueba inmunocromatográfica (ICT), que proporcionan un método rápido de diagnóstico en la atención al paciente. Mediante ICT, un técnico puede realizar una determinación a pie de cama del paciente, sin necesidad de un laboratorio. [ 18 ] La detección mediante ICT es altamente específica para el microbio causante de la infección. [ 19 ]

La cromatografía de inmunoafinidad se ha aplicado al aislamiento selectivo de componentes derivados de la sangre, incluidos linfocitos y proteínas específicas, utilizando fases estacionarias funcionalizadas con anticuerpos. [ 20 ] Aunque no es un método rutinario para estimar el tiempo transcurrido desde la deposición (TDD) de manchas de sangre, los análisis moleculares dirigidos utilizados en la investigación del TSD, como la proteómica, la metabolómica y el perfilado de ácidos nucleicos, pueden incorporar pasos de enriquecimiento basados ​​en inmunoafinidad para mejorar la sensibilidad de los biomarcadores de baja abundancia. [ 21 ] [ 22 ] Los métodos de detección basados ​​en anticuerpos también se utilizan en serología forense para identificar sangre y evaluar su persistencia en sustratos a lo largo del tiempo, lo que demuestra el papel más amplio de la especificidad inmunológica en el análisis forense de fluidos corporales. [ 23 ]

Cromatografía de afinidad de iones metálicos inmovilizados

La cromatografía de afinidad de iones metálicos inmovilizados (IMAC) se basa en el enlace covalente coordinado específico de los aminoácidos, en particular la histidina, con los metales. Esta técnica funciona permitiendo que las proteínas con afinidad por iones metálicos se retengan en una columna que contiene iones metálicos inmovilizados, como cobalto, níquel o cobre para la purificación de proteínas o péptidos que contienen histidina, o hierro, zinc o galio para la purificación de proteínas o péptidos fosforilados. Muchas proteínas naturales no tienen afinidad por los iones metálicos; por lo tanto, se puede utilizar la tecnología de ADN recombinante para introducir dicha etiqueta proteica en el gen correspondiente. Los métodos utilizados para eluir la proteína de interés incluyen cambiar el pH o agregar una molécula competitiva, como el imidazol . [ 24 ] [ 25 ]

Una columna de cromatografía que contiene perlas de níquel-agarosa utilizada para la purificación de proteínas con etiquetas de histidina.

Proteínas recombinantes

Posiblemente, el uso más común de la cromatografía de afinidad sea la purificación de proteínas recombinantes. Las proteínas con una afinidad conocida se marcan para facilitar su purificación. La proteína puede haber sido modificada genéticamente para permitir su selección por unión afinitaria; esto se conoce como proteína de fusión. Las etiquetas proteicas incluyen hexahistidina ( His ), glutatión -S-transferasa (GST), proteína de unión a maltosa (MBP) y la variante CL7 de la colicína E7. Las etiquetas de histidina tienen afinidad por iones de níquel , cobalto , zinc , cobre y hierro , que se han inmovilizado mediante la formación de enlaces covalentes coordinados con un quelante incorporado en la fase estacionaria. Para la elución, se utiliza un exceso de un compuesto capaz de actuar como ligando de iones metálicos, como el imidazol . La GST tiene afinidad por el glutatión, que está disponible comercialmente inmovilizado como agarosa de glutatión. Durante la elución, se utiliza un exceso de glutatión para desplazar la proteína marcada. CL7 tiene afinidad y especificidad por la proteína de inmunidad 7 (Im7), que se encuentra disponible comercialmente inmovilizada como resina de agarosa Im7. Para la elución, se aplica una proteasa activa y específica del sitio a la resina Im7 para liberar la proteína sin la etiqueta. [ 26 ]

Lectinas

La cromatografía de afinidad con lectinas es una forma de cromatografía de afinidad en la que se utilizan lectinas para separar componentes dentro de la muestra. Las lectinas, como la concanavalina A, son proteínas que pueden unirse a moléculas específicas de carbohidratos alfa-D-manosa y alfa-D-glucosa. Algunas moléculas de carbohidratos comunes que se utilizan en la cromatografía de afinidad con lectinas son Con A-Sepharose y WGA-agarose. [ 27 ] Otro ejemplo de lectina es la aglutinina de germen de trigo, que se une a la DN-acetilglucosamina. [ 28 ] La aplicación más común es separar glicoproteínas de proteínas no glicosiladas, o una glicoforma de otra. [ 29 ] Aunque existen varias formas de realizar la cromatografía de afinidad con lectinas, el objetivo es extraer un ligando de azúcar de la proteína deseada. [ 27 ]

Especialidad

Otro uso de la cromatografía de afinidad es la purificación de proteínas específicas mediante una matriz de gel exclusiva para cada proteína. Por ejemplo, la purificación de la β-galactosidasa de E. coli se realiza mediante cromatografía de afinidad utilizando agarosa de p-aminobenil-1-tio-β-D-galactopiranosilo como matriz de afinidad. Esta agarosa se utiliza porque contiene un grupo galactopiranosilo, que actúa como un buen análogo de sustrato para la β-galactosidasa de E. coli. Esta propiedad permite que la enzima se una a la fase estacionaria de la matriz de afinidad, y la β-galactosidasa se eluye añadiendo concentraciones crecientes de sal a la columna. [ 30 ]

fosfatasa alcalina

La fosfatasa alcalina de E. coli se puede purificar utilizando una matriz de DEAE-celulosa. La fosfatasa alcalina tiene una ligera carga negativa, lo que le permite unirse débilmente a los grupos amina con carga positiva de la matriz. La enzima se puede eluir añadiendo un tampón con mayor concentración de sal. [ 31 ]

Cromatografía de afinidad con boronato

La cromatografía de afinidad con boronato consiste en utilizar ácido borónico o boronato para eluir y cuantificar las cantidades de glicoproteínas . Se han realizado adaptaciones clínicas de este tipo de cromatografía para determinar la evaluación a largo plazo de pacientes diabéticos mediante el análisis de su hemoglobina glicosilada . [ 28 ]

Purificación de la albúmina sérica

La purificación por afinidad de la contaminación por albúmina y macroglobulina resulta útil para eliminar el exceso de albúmina y la contaminación por α2 - macroglobulina durante la espectrometría de masas. En la purificación por afinidad de la albúmina sérica, el soporte utilizado para la recolección o atracción de las proteínas séricas puede ser Cibacron Blue-Sepharose. Posteriormente, las proteínas séricas se pueden eluir del adsorbente con un tampón que contiene tiocianato (SCN⁻ ) . [ 32 ]

Cromatografía de afinidad débil

La cromatografía de afinidad débil [ 33 ] ( WAC ) es una técnica de cromatografía de afinidad para la detección de afinidad en el desarrollo de fármacos. [ 34 ] [ 35 ] La WAC es una técnica de cromatografía líquida basada en la afinidad que separa compuestos químicos según sus diferentes afinidades débiles a una diana inmovilizada. Cuanto mayor sea la afinidad de un compuesto hacia la diana, más tiempo permanecerá en la unidad de separación, lo que se expresará como un mayor tiempo de retención. La medición y clasificación de la afinidad se puede obtener procesando los tiempos de retención de los compuestos analizados. La cromatografía de afinidad forma parte de un conjunto más amplio de técnicas utilizadas en la identificación de dianas farmacológicas basada en quimioproteómica .

La tecnología WAC se ha probado frente a diversos objetivos proteicos : proteasas , quinasas , chaperonas y objetivos de interacción proteína-proteína (PPI). Se ha demostrado que WAC es más eficaz que los métodos establecidos para el cribado basado en fragmentos. [ 35 ]

Historia

La cromatografía de afinidad fue concebida y desarrollada por primera vez por Pedro Cuatrecasas y Meir Wilchek . [ 36 ] [ 37 ]

Referencias

  1. ↑ Aizpurua-Olaizola, Oier; Sastre Torano, Javier; Pukin, Aliaksei; Fu, ou; Bendiciones, Geert Jan; de Jong, Gerhardus J.; Pieters, Roland J. (enero de 2018). "Electroforesis capilar de afinidad para la evaluación de la afinidad de unión de inhibidores de la toxina del cólera a base de carbohidratos". Electroforesis . 39 (2): 344– 347. doi : 10.1002/elps.201700207 . hdl : 1874/362143 . PMID 28905402 . S2CID 33657660 .  
  2. ↑ Ninfa, Alexander J.; Ballou, David P.; Benore, Marilee (2009). Enfoques fundamentales de laboratorio para bioquímica y biotecnología (2.ª ed.). Wiley. pág. 133. ISBN   978-0-470-08766-4.
  3. ↑ ""Introducción a la cromatografía de afinidad"" . bio-rad.com . Bio-Rad. 14 de septiembre de 2020 . Consultado el 14 de septiembre de 2020 .
  4. ↑ Zachariou, Michael, ed. (2008). Cromatografía de afinidad: métodos y protocolos (2.ª ed.). Totowa, NJ: Humana Press. pp. 1–2 . ISBN   978-1-58829-659-7.
  5. 1 2 Bonner, Philip LR (2007). Purificación de proteínas (2.ª ed.). Totowa, NJ: Taylor & Francis Group. ISBN  978-0-415-38511-4.
  6. ↑ Kumar, Pranav (2018). Biofísica y biología molecular . Nueva Delhi: Pathfinder Publication. pág. 11. ISBN  978-93-80473-15-4.
  7. ↑ Fanali, Salvatore; Haddad, Paul R.; Poole, Colin F.; Schoenmakers, Peter; Lloyd, David, eds. (2013). Cromatografía líquida: Aplicaciones . Manuales de ciencia de la separación. Saint Louis: Elsevier. pág. 3. ISBN  978-0-12-415806-1.
  8. ↑ Baur, Daniel; Angarita, Monica; Müller-Späth, Thomas; Steinebach, Fabian; Morbidelli, Massimo (2016). "Comparación de procesos de captura de proteína A en múltiples columnas, tanto por lotes como continuos, mediante diseño óptimo". Biotechnology Journal . 11 (7): 920– 931. doi : 10.1002/biot.201500481 . hdl : 11311/1013726 . PMID 26992151. S2CID 205492204 .  
  9. 1 2 "Cube Biotech" . Cube Biotech . Consultado el 11 de septiembre de 2019 .
  10. ↑ Ahern, Kevin; Rajagopal, Indira (12 de febrero de 2015). Bioquímica gratis y fácil (3.ª ed.). DaVinci Press. pág. 822. hdl : 10211.3/206119 .  
  11. ↑ Grisham, Charles M. (1 de enero de 2013). Bioquímica . Brooks/Cole, Cengage Learning. ISBN 978-1-133-10629-6OCLC 777722371​​ 
  12. ↑ Mahmoudi Gomari, Mohammad; Saraygord-Afshari, Neda; Farsimadan, Marziye; Rostami, Neda; Aghamiri, Shahin; Farajollahi, Mohammad M. (1 de diciembre de 2020). "Oportunidades y desafíos de las técnicas de purificación de proteínas asistidas por etiquetas: aplicaciones en la industria farmacéutica" . Biotechnology Advances . 45 107653. doi : 10.1016/j.biotechadv.2020.107653 . ISSN 0734-9750 . PMID 33157154. S2CID 226276355 .   
  13. ↑ "Cromatografía de afinidad" .
  14. ↑ Thompson, Nancy E.; Foley, Katherine M.; Stalder, Elizabeth S.; Burgess, Richard R. (2009). «Capítulo 28: Identificación, producción y uso de anticuerpos monoclonales sensibles a polioles para cromatografía de inmunoafinidad». Guía para la purificación de proteínas, 2.ª edición . Métodos en enzimología. Vol. 463. págs. 475–494 . doi : 10.1016/s0076-6879(09)63028-7 . ISBN   978-0-12-374536-1. PMID 19892188 . 
  15. ↑ Uhlén, Mathias (abril de 2008). "La afinidad como herramienta en las ciencias de la vida" . BioTechniques . 44 (5): 649– 654. doi : 10.2144/000112803 . PMID 18474040 . 
  16. ↑ Multia, Evgen; Tear, Crystal Jing Ying; Palviainen, Mari; Siljander, Pia; Riekkola, Marja-Liisa (diciembre de 2019). "Aislamiento rápido de una población altamente específica de vesículas extracelulares derivadas de plaquetas a partir de plasma sanguíneo mediante una columna monolítica de afinidad, inmovilizada con anticuerpo anti-CD61 humano". Analytica Chimica Acta . 1091 : 160–168 . Bibcode : 2019AcAC.1091..160M . doi : 10.1016/j.aca.2019.09.022 . hdl : 10138/321264 . PMID 31679569. S2CID 203147714 .  
  17. ↑ Multia, Evgen; Liangsupree, Thanaporn; Jussila, Matti; Ruiz-Jimenez, Jose; Kemell, Marianna; Riekkola, Marja-Liisa (6 de octubre de 2020). " Sistema automatizado de aislamiento y fraccionamiento en línea para biomacromoléculas de tamaño nanométrico del plasma humano" . Analytical Chemistry . 92 (19): 13058– 13065. doi : 10.1021/acs.analchem.0c01986 . PMC 7586295. PMID 32893620 .  
  18. ↑ Luppa, Peter (2018). Pruebas en el punto de atención: principios y aplicaciones clínicas . Berlín, Alemania: Springer. págs. 71–72 . ISBN  978-3-662-54497-6.
  19. ↑ Muller, JD; Wilks, CR; O'Riley, KJ; Condron, RJ; Bull, R.; Mateczun, A. (abril de 2004). "Especificidad de una prueba inmunocromatográfica para el ántrax". Australian Veterinary Journal . 82 (4): 220– 222. doi : 10.1111/j.1751-0813.2004.tb12682.x . PMID 15149073 . 
  20. ↑ Mohr, Fabian; Przibilla, Sabine; Leonhardt, Franziska; Stemberger, Christian; Dreher, Stefan; Müller, Thomas R; Fräßle, Simon P; Schmidt, Georg P; Kiene, Marie-Luise; Stadler, Herbert; Busch, Dirk H (13 de noviembre de 2018). "Cromatografía de inmunoafinidad eficiente de linfocitos directamente de sangre total" . Scientific Reports . 8 .
  21. ↑ Elliott, Colin I; Shafer, Aaron B; Stotesbury, Theresa E (23 de octubre de 2022). "El punto crucial del tiempo: un metaanálisis de la degradación de sangre entera ex vivo" . Forensic Science International: Synergy . 2 .
  22. ↑ Sacco, Matteo A; Gualtieri, Saverio; Tarallo, Alessandro P; Calanna, Luca; Russa, Raffaele L; Aquila, Isabella (8 de julio de 2024). "El papel de las investigaciones moleculares en la estimación del tiempo transcurrido desde la deposición (TSD) de las manchas de sangre: una revisión sistemática de la literatura" (PDF) . Química forense . 30 .
  23. ↑ Medina-Paz, Francisco; Kuba, Brandon; Kryvorutsky, Emily; Roca, Gabriela; Zapico, Sara C (20 de marzo de 2024). "Evaluación de la detección de sangre y semen y la recolección de ADN a partir de hisopos hasta tres meses después de la deposición en cinco materiales de tela diferentes" . Forensic Science International . 25 .
  24. ↑ Singh, Naveen K.; DSouza, Roy N.; Bibi, Noor S.; Fernández-Lahore, Marcelo (2015). "Captura directa de proteínas con etiqueta His6 mediante criogeles megaporosos desarrollados para cromatografía de afinidad de iones metálicos" . En Reichelt, S. (ed.). Cromatografía de afinidad . Métodos en biología molecular. Vol. 1286. Nueva York: Humana Press. pp. 201–212 . doi : 10.1007/978-1-4939-2447-9_16 . ISBN   978-1-4939-2447-9. PMID 25749956 . 
  25. ↑ Gaberc-Porekar, Vladka K.; Menart, Viktor (2001). "Perspectivas de la cromatografía de afinidad de metales inmovilizados". J Biochem Biophys Methods . 49 ( 1– 3): 335– 360. doi : 10.1016/S0165-022X(01)00207-X . PMID 11694288 . 
  26. ↑ Vassylyeva, Marina N.; Klyuyev, Sergiy; Vassylyev, Alexey D.; Wesson, Hunter; Zhang, Zhuo; Renfrow, Matthew B.; Wang, Hengbin; Higgins, N. Patrick; Chow, Louise T.; Vassylyev, Dmitry G. (27 de junio de 2017). "Cromatografía eficiente de ultra alta afinidad en una purificación en un solo paso de proteínas complejas" . Actas de la Academia Nacional de Ciencias de los Estados Unidos de América . 114 (26): E5138– E5147. Bibcode : 2017PNAS..114E5138V . doi : 10.1073/pnas.1704872114 . ISSN 0027-8424 . PMC 5495267 . PMID 28607052 .   
  27. 1 2 Freeze, HH (mayo de 2001). «Cromatografía de afinidad con lectinas». Current Protocols in Protein Science . págs. 9.1.1–9.1.9. doi : 10.1002/0471140864.ps0901s00 . ISBN  978-0-471-14086-3. ISSN 1934-3663 . PMID 18429210 . S2CID 3197260 .   
  28. 1 2 Hage, David (mayo de 1999). "Cromatografía de afinidad: una revisión de las aplicaciones clínicas" (PDF) . Química clínica . 45 (5): 593– 615. doi : 10.1093/clinchem/45.5.593 . PMID 10222345 . 
  29. ↑ "GE Healthcare Life Sciences, Lectina inmovilizada" . Archivado del original el 3 de marzo de 2012. Consultado el 29 de noviembre de 2010 .
  30. ↑ Ninfa, Alexander J.; Ballou, David P.; Benore, Marilee (2006). Enfoques fundamentales de laboratorio para bioquímica y biotecnología (2.ª ed.). Wiley. p. 153.  
  31. ↑ Ninfa, Alexander J.; Ballou, David P.; Benore, Marilee (2010). Enfoques fundamentales de laboratorio para bioquímica y biotecnología (2.ª ed.). Hoboken, NJ: John Wiley. p. 240. ISBN   978-0-470-08766-4OCLC 420027217​​ 
  32. ↑ Naval, Javier; Calvo, Miguel; Lampreave, Fermín; Piñeiro, Andrés (1 de enero de 1983). "Cromatografía de afinidad de albúmina sérica: un experimento de laboratorio ilustrativo sobre interacciones biomoleculares". Educación Bioquímica . 11 (1): 5– 8. doi : 10.1016/0307-4412(83)90004-3 . ISSN 1879-1468 . 
  33. ↑ Zopf, D.; Ohlson, S. (julio de 1990). "Cromatografía de baja afinidad". Nature . 346 (6279): 87– 88. Bibcode : 1990Natur.346...87Z . doi : 10.1038/346087a0 . ISSN 0028-0836 . S2CID 4306269 .  
  34. ↑ Duong-Thi, MD; Meiby, E.; Bergström, M.; Fex, T.; Isaksson, R.; Ohlson, S. (2011). "Cromatografía de afinidad débil como un nuevo enfoque para la detección de fragmentos en el descubrimiento de fármacos". Analytical Biochemistry . 414 (1): 138– 146. doi : 10.1016/j.ab.2011.02.022 . PMID 21352794 . 
  35. 1 2 Meiby, E.; Simmonite, H.; Le Strat, L.; Davis, B.; Matassova, N.; Moore, JD; Mrosek, M.; Murray, J.; Hubbard, RE; Ohlson, S. (2013). "Fragment Screening by Weak Affinity Chromatography: Comparison with Established Techniques for Screening against HSP90". Analytical Chemistry . 85 (14): 6756– 6766. doi : 10.1021/ac400715t . PMID 23806099 . 
  36. ↑ "Meir Wilchek - Fundación Wolf" . Fundación Wolf . 9 de diciembre de 2018. Consultado el 17 de marzo de 2021. La cromatografía de afinidad es una técnica novedosa concebida por Cuatrecasas y Wilchek .
  37. ↑ Cuatrecasas, P; Wilchek, M; Anfinsen, CB (octubre de 1968). "Purificación selectiva de enzimas mediante cromatografía de afinidad" . Actas de la Academia Nacional de Ciencias . 61 (2): 636– 643. Bibcode : 1968PNAS...61..636C . doi : 10.1073/pnas.61.2.636 . PMC 225207. PMID 4971842 .  
  • "Cromatografía de afinidad: Principio, procedimiento y nota detallada avanzada – 2020".
  • "¿Qué es la cromatografía de afinidad?"