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Una aguja de inoculación es un instrumento de laboratorio utilizado en microbiología para transferir e inocular microorganismos vivos . [ 1 ] Es una de las herramientas de laboratorio biológico más comunes y puede ser desechable o reutilizable. [ 1 ] Una aguja de inoculación reutilizable estándar está hecha de alambre de nicromo o platino fijado a un mango metálico. [ 2 ] [ 3 ] Una aguja de inoculación desechable suele estar hecha de resina plástica. La base de la aguja está roma, lo que resulta en un extremo romo. [ 2 ] [ 3 ]
Usos
Las agujas de inoculación se utilizan principalmente en microbiología para el estudio de bacterias y hongos en medios semisólidos. La biotecnología , la biología celular y la inmunología también pueden emplear métodos de cultivo orientados con agujas. [ 2 ] [ 4 ] [ 5 ]
La aplicación de agujas de inoculación se centra en la inoculación y el aislamiento de regiones muy definidas de los cultivos y en los requisitos de mínima alteración entre dos colonias microbianas muy próximas. [ 5 ] También se puede utilizar en el arpón bajo un microscopio de baja magnificación . [ 6 ]
La siembra en placas de agar estriado, la inoculación en cola de pez de cultivos en tubo inclinado y la inoculación de cultivos por punción se pueden realizar con la aguja de inoculación. [ 1 ] [ 7 ] Los cultivos por punción requieren específicamente la aguja de inoculación y se utilizan para estudiar la motilidad celular, los requerimientos de oxígeno microbiano mediante cultivos en tioglicolato y la licuefacción de bacterias en gelatina. [ 2 ] [ 3 ] [ 4 ]
Operación
Esterilización
La aguja de inoculación se esteriliza mediante la técnica aséptica . [ 1 ] [ 2 ] [ 3 ] [ 7 ] Se utiliza una llama abierta de un incinerador, un mechero Bunsen o un mechero de alcohol para flamear la punta y la longitud de la aguja que estará en contacto con el inóculo (o el propágulo ). [ 2 ] [ 3 ] Para facilitar la manipulación, es práctica común sujetar la aguja con la mano dominante como si se sostuviera un lápiz. La aguja se flameará en un ángulo descendente a través del cono interior de la llama hasta que esté al rojo vivo. [ 1 ] El ángulo descendente minimizará la cantidad de aerosoles microbianos creados. [ 1 ] [ 2 ] [ 3 ]
Las agujas de inoculación deben esterilizarse antes y después del contacto con formas de vida microbianas para garantizar que no haya contaminación del cultivo, los medios estériles y el entorno circundante. [ 1 ]
Transferir
En la inoculación, la aguja de inoculación se utiliza primero para transferir formas de vida microbianas de un cultivo a la aguja para su uso en procedimientos de inoculación posteriores. Las fuentes de inóculo incluyen cultivos en caldo, cultivos en agar inclinado y cultivos en placa. [ 1 ] [ 2 ] [ 3 ] [ 5 ]
- Cultivo de caldo
Se utiliza una aguja de inoculación para transferir microorganismos de un cultivo líquido, empleando primero un mezclador de vórtice para asegurar una suspensión uniforme de los microorganismos en el caldo. [ 1 ] A continuación, se aplica una técnica aséptica a la aguja. Una vez esterilizada y flameada, se retira la tapa del caldo de cultivo con la mano que la manipula. El extremo abierto del caldo de cultivo se flamea para reducir el riesgo de contaminación y la generación de aerosoles. [ 2 ] [ 3 ]
Mientras se mantiene fija la posición de la aguja, el caldo de cultivo se moverá hacia arriba hasta que la punta de la aguja quede sumergida. [ 3 ] Durante la extracción del caldo de cultivo, la aguja y la mano que la sostiene no deben moverse para evitar la acción de resorte. [ 3 ] [ 5 ] La transferencia del caldo a la aguja concluye flameando el extremo abierto del caldo de cultivo y cerrando la tapa mientras se mantiene inmóvil la mano que sostiene la aguja.
- Cultura oblicua
En la transferencia de cultivos en tubo inclinado, la aguja de inoculación se tratará primero con la técnica aséptica mediante flameado. A continuación, se retira la tapa del tubo de cultivo inclinado y se asegura con la mano que sujeta la aguja. Flamear el extremo abierto del tubo de cultivo inclinado evitará la contaminación y la formación de aerosoles. [ 2 ] [ 3 ]
La transferencia se produce cuando la punta de la aguja de inoculación entra en contacto con la superficie de agar del cultivo en tubo inclinado. La aguja de inoculación no debe moverse durante el proceso. El cultivo en tubo inclinado se acerca a la aguja para evitar que esta se mueva bruscamente. [ 1 ] [ 3 ] Una vez completada la transferencia del cultivo en tubo inclinado a la aguja, el extremo abierto del cultivo se trata con fuego y se vuelve a colocar la tapa.
- Cultivo en placa
Se utiliza una aguja de inoculación para transferir microorganismos de un cultivo en placa a la aguja, esterilizando previamente la aguja para evitar la contaminación. A continuación, se retira la tapa de la placa de agar para que la aguja acceda a los microorganismos cultivados. La tapa se mantiene suspendida sobre la placa para evitar la contaminación del entorno. [ 1 ]
Tras la incineración, la aguja de inoculación se enfría sobre una zona no inoculada del cultivo en placa de agar. [ 1 ] Un calor excesivo matará el inóculo durante el contacto directo con la aguja de inoculación flameada. [ 1 ] La aguja de inoculación se retira del cultivo de agar tras obtener una pequeña colonia y se vuelve a colocar la tapa de la placa de agar.
Inoculación
La inoculación de los microorganismos se realizará inmediatamente después de la transferencia del cultivo a la aguja de inoculación. El inóculo se inocula comúnmente en cultivos líquidos, cultivos en agar inclinado, cultivos en placa y cultivos por punción. [ 1 ] [ 2 ] [ 3 ] [ 4 ] [ 5 ] [ 7 ]
- Cultivo de caldo
Se utiliza una aguja de inoculación para inocular un cultivo en caldo estéril. Flamear el extremo abierto del caldo lo mantendrá estéril. El caldo se moverá hacia la aguja de manera que la punta quede sumergida, manteniendo la aguja en su posición original. [ 1 ] Agitar cuidadosamente la aguja puede facilitar la inoculación del microorganismo desde la aguja al caldo estéril. [ 1 ]
A continuación, se extrae el cultivo en caldo inoculado de la aguja. Se aplica una técnica aséptica al extremo abierto del cultivo para evitar la contaminación y se esteriliza la aguja mediante flameado.
- Cultura oblicua
Se utiliza una aguja de inoculación para inocular un cultivo inclinado en una técnica de inoculación en cola de pez. [ 1 ] Después de que los microorganismos se transfieren del cultivo microbiano original a la aguja de inoculación, se destapa el cultivo inclinado estéril. El extremo abierto del cultivo inclinado destapado se flamea. El cultivo inclinado se coloca para que se mueva hacia arriba en la aguja hasta que la punta de la aguja de inoculación entre en contacto ligero con la superficie de la base del medio estéril. [ 1 ] [ 2 ] [ 4 ] La aguja de inoculación inocula el agar estéril mediante la manipulación del medio de manera que la punta de la aguja roce la superficie del agar en un patrón de zigzag. [ 1 ] Luego se aplica una técnica aséptica a la aguja de inoculación retirada.
- Cultivo en placa
La inoculación de un cultivo en placa se realiza mediante la técnica de estrías para crear una placa de estrías. [ 1 ] [ 2 ] [ 4 ] Después de levantar la tapa de modo que quede suspendida sobre la placa de agar estéril, la aguja de inoculación se deslizará sobre la placa en direcciones controladas. [ 1 ] Se pueden crear aerosoles microbianos al golpear la punta de inoculación contra los lados de la placa de agar. [ 1 ] [ 2 ] [ 4 ] Luego, la aguja de inoculación se retira del cultivo de la placa de agar inoculada y se flamea.
- cultura de apuñalamientos
Una aguja de inoculación es una herramienta esencial para inocular un cultivo por punción. [ 4 ] [ 7 ] Se retira la tapa estéril del cultivo por punción y se flamea el extremo abierto. Luego, la punta de la aguja y su longitud se introducen en el medio de punción y se detienen cuando la punta de la aguja alcanza 0,5 pulgadas de la parte inferior del medio de punción. [ 7 ] La aguja de inoculación se retira del medio en la misma dirección y trayectoria en la que se introdujo en el medio de punción para evitar el efecto de oscilación que podría perturbar el cultivo. [ 4 ] [ 7 ] La aguja se esteriliza mediante flameado.
Véase también
Galería
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Referencias
- 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 TRASLADOS ASÉPTICOS COMUNES Y MÉTODOS DE INOCULACIÓN . págs. 4–8 .
- 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 Dubey, RC (2014). Practical for Class XI (2.ª ed.). S. Chand Publishing. ISBN 978-81-219-2417-7.
- 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 Maheshwari, DK (2002). Laboratorio de microbiología: reglas y requisitos básicos (2.ª ed.). S. Chand Publishing. pág. 6.
- 1 2 3 4 5 6 7 8 Parija, Subhash Chandra (2012). Libro de texto de microbiología e inmunología (2.ª ed.). Elsevier. pág. 38. ISBN 978-81-312-2810-4.
- 1 2 3 4 5 "Muestreo e inoculación" . Manual de laboratorio de biología celular . Manual de laboratorio de biología celular y guía de seguridad de Hendrix College. Archivado del original el 9 de octubre de 2016. Recuperado el 28 de octubre de 2016 .
- ↑ Ørskov, J. (17 de enero de 1992). "Método para el aislamiento de bacterias en cultivo puro a partir de células individuales y procedimiento para el seguimiento directo del crecimiento bacteriano en un medio sólido". Journal of Bacteriology . 7 (6): 547– 548.
- 1 2 3 4 5 6 Introducción a la microbiología . Colección Americana de Cultivos Tipo. 2015. págs. 10–11 , 26, 28, 30–31 .
- Equipos de microbiología