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El caldo de lisogenia ( LB ) es un medio nutricionalmente rico que se utiliza principalmente para el crecimiento de bacterias. Su creador, Giuseppe Bertani , pretendía que LB significara caldo de lisogenia , [ 1 ] pero también se le conoce coloquialmente como caldo Luria , caldo Lennox , caldo de vida o medio Luria -Bertani . [ 2 ] La fórmula del medio LB se publicó en 1951 en el primer artículo de Bertani sobre lisogenia . En este artículo describió el experimento de explosión única modificado y el aislamiento de los fagos P1 , P2 y P3 . Desarrolló el medio LB para optimizar el crecimiento de Shigella y la formación de placas . [ 1 ] [ 3 ]
Las formulaciones del medio LB han sido un estándar de la industria para el cultivo de Escherichia coli desde la década de 1950. [ 4 ] [ 5 ] Estos medios se han utilizado ampliamente en aplicaciones de microbiología molecular para la preparación de ADN plasmídico y proteínas recombinantes . Sigue siendo uno de los medios más comunes utilizados para el mantenimiento y cultivo de cepas recombinantes de laboratorio de Escherichia coli . [ 5 ] [ 4 ] Sin embargo, para estudios fisiológicos, se desaconseja el uso del medio LB. [ 6 ]
Existen varias formulaciones comunes de LB. Aunque son diferentes, generalmente comparten una composición de ingredientes bastante similar utilizada para promover el crecimiento, incluyendo los siguientes:
- Péptidos y peptonas de caseína
- Vitaminas (incluidas las vitaminas del grupo B)
- Oligoelementos (por ejemplo, nitrógeno, azufre, magnesio)
- minerales
El cloruro de sodio proporciona los iones de sodio necesarios para el transporte y el equilibrio osmótico . La triptona se utiliza para aportar aminoácidos esenciales , como péptidos y peptonas, a las bacterias en crecimiento, mientras que el extracto de levadura proporciona una gran cantidad de compuestos orgánicos beneficiosos para el crecimiento bacteriano. Estos compuestos incluyen vitaminas y ciertos oligoelementos.
En su artículo original de 1951, Bertani utilizó 10 gramos de NaCl y 1 gramo de glucosa por cada litro de solución; Luria, en su "caldo L" de 1957, copió la receta original de Bertani al pie de la letra. [ 7 ] Las recetas publicadas posteriormente generalmente han omitido la glucosa.
Fórmula
Las formulaciones generalmente difieren en la cantidad de cloruro de sodio, lo que permite seleccionar las condiciones osmóticas adecuadas para la cepa bacteriana específica y las condiciones de cultivo deseadas. Las formulaciones con bajo contenido de sal, Lennox y Luria, son ideales para cultivos que requieren antibióticos sensibles a la sal.
- LB (Miller) (10 g/L de NaCl)
- LB (Lennox) (5 g/L de NaCl)
- LB (Luria) (0,5 g/L NaCl) [ 8 ]
Ajuste del pH
Antes de la esterilización en autoclave, algunos laboratorios ajustan el pH del medio LB a 7,5 u 8 con hidróxido de sodio. Sin embargo, el hidróxido de sodio no proporciona capacidad amortiguadora al medio, lo que provoca cambios rápidos en el pH durante el cultivo bacteriano. Para evitar esto, algunos laboratorios prefieren ajustar el pH con tampón TRIS de 5 a 10 mmol/L , diluido a partir de una solución madre de TRIS de 1 mol/L al pH deseado. No obstante, no es absolutamente necesario ajustar el pH en la mayoría de los casos. Algunos laboratorios lo ajustan a 7,0 simplemente como medida de precaución. [ 8 ]
Véase también
- placa de agar
- Salvador Luría
- Jeffrey H. Miller
- Medio SOC : otro medio ampliamente utilizado para el cultivo de Escherichia coli en trabajos de biología molecular .
Referencias
- 1 2 Bertani, G. (2004). " Lisogenia a mediados del siglo XX: P1, P2 y otros sistemas experimentales" . Journal of Bacteriology . 186 (3): 595– 600. doi : 10.1128/JB.186.3.595-600.2004 . PMC 321500. PMID 14729683 .
- ^ Lindqvist, BH; Haggård-Ljungqvist, E; Calendario, R (3 de abril de 2015). «Giuseppe Bertani (1923-2015)» . Bacteriófago . 5 (2) e1054060. doi : 10.1080/21597081.2015.1054060 . PMC 4588218 . PMID 26442191 .
- ↑ Bertani, G (1951). "Estudios sobre la lisogénesis. I. El modo de liberación de fagos por Escherichia coli lisogénica " . Journal of Bacteriology . 62 (3): 293– 300. doi : 10.1128/jb.62.3.293-300.1951 . PMC 386127. PMID 14888646 .
- 1 2 Ezraty, Benjamin; Henry, Camille; Hérisse, Marion; Denamur, Erick; Barras, Frédéric (septiembre de 2014). "Medios de cultivo comerciales de caldo de lisogenia y estrés oxidativo: una historia cautelosa". Free Radical Biology and Medicine . 74 : 245–251 . doi : 10.1016/j.freeradbiomed.2014.07.010 . PMID 25048972 .
- 1 2 "Introducción a los medios microbianos" . Millipore Sigma . Consultado el 1 de agosto de 2024 .
- ↑ Hiroshi, Nikaido (2009). "Las limitaciones de LB Medium" . Pequeñas cosas consideradas .
- ↑ Luria, SE; Burrous, Jeanne W. (octubre de 1957). " Hibridación entre Escherichia coli y Shigella " . Journal of Bacteriology . 74 (4): 461– 476. doi : 10.1128/jb.74.4.461-476.1957 . PMC 289941. PMID 13475269 .
- 1 2 MacWilliams, Maria P.; Liao, Min-Ken (9 de octubre de 2006). "Protocolo de usos y medios de cultivo Luria Broth (LB) y Luria Agar (LA)" (PDF) . Sociedad Americana de Microbiología . Recuperado el 6 de marzo de 2023 .
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