Hispanopedia WikiLa nucleasa microcócica ( EC 3.1.31.1, S7 Nuclease , MNasa , endonucleasa del bazo , termonucleasa , nucleasa T , endonucleasa microcócica , nucleasa T' , nucleasa estafilocócica , fosfodiesterasa del bazo , nucleasa de Staphylococcus aureus , nucleasa B de Staphylococcus aureus , ribonucleato (desoxinucleato) 3'-nucleotidohidrolasa ) es una endoexonucleasa que digiere preferentemente ácidos nucleicos monocatenarios . La tasa de escisión es 30 veces mayor en el lado 5' de A o T que en G o C y da como resultado la producción de mononucleótidos y oligonucleótidos con fosfatos terminales 3' . La enzima también es activa contra ADN y ARN bicatenarios y todas las secuencias se escindirán en última instancia.
Características
La enzima tiene un peso molecular de 16,9 kDa.
El pH óptimo se informa como 9,2. La actividad enzimática depende estrictamente del Ca 2+ y el pH óptimo varía según la concentración de Ca 2+ . [1] Por lo tanto, la enzima se inactiva fácilmente con EGTA .
Fuentes
Esta enzima es la nucleasa extracelular de Staphylococcus aureus . Dos cepas, V8 y Foggi, producen enzimas casi idénticas. [2] Una fuente común son las células de E. coli que portan un gen nuc clonado que codifica la nucleasa extracelular de Staphylococcus aureus (nucleasa microcócica).
Estructura
La estructura tridimensional de la nucleasa microcócica (en aquel entonces denominada nucleasa estafilocócica) se resolvió muy temprano en la historia de la cristalografía de proteínas , en 1969, [3] depositada como el ahora obsoleto archivo 1SNS del Protein Data Bank . Hay estructuras cristalinas más recientes y de mayor resolución disponibles para la forma apo como el archivo 1SNO del Protein Data Bank: [1] y para la forma inhibida por timidina-difosfato como el archivo 3H6M del Protein Data Bank: [2] o 1SNC: [3]. Como se ve en el diagrama de cintas anterior, la molécula de nucleasa tiene 3 hélices alfa largas y una lámina beta de 5 cadenas en forma de barril , en una disposición conocida como pliegue OB (para pliegue de unión a oligonucleótidos) según la clasificación de la base de datos SCOP .
Aplicaciones
- Secuenciación CUT&RUN , escisión controlada dirigida por anticuerpos mediante nucleasa micrococal para perfil transcriptómico.
- Hidrólisis de ácidos nucleicos en extractos crudos libres de células.
- Secuenciación de ARN .
- Preparación de lisados de reticulocitos de conejo .
- Estudios de la estructura de la cromatina .
- Extracción de ácidos nucleicos de preparaciones de proteínas de laboratorio que permiten el plegamiento de proteínas y estudios de estructura-función.
- Investigación sobre los mecanismos del plegamiento de proteínas .
Véase también
Referencias
- ^ Heins JN, Suriano JR, Taniuchi H, Anfinsen CB (1967). "Caracterización de una nucleasa producida por Staphylococcus aureus". J. Biol. Chem . 242 (5): 1016–20. doi : 10.1016/S0021-9258(18)96225-3 . PMID 6020427.
- ^ Cusumano CL, Taniuchi H, Anfinsen CB (1968). "Nucleasa estafilocócica (cepa Foggi). I. Orden de fragmentos de bromuro de cianógeno y un "cuarto" residuo de histidina". J. Biol. Chem . 243 (18): 4769–77. doi : 10.1016/S0021-9258(18)93185-6 . PMID 5687719.
- ^ Arnone A, Bier J, et al. (1971). "Una estructura de alta resolución de un complejo inhibidor de la nucleasa extracelular de Staphylococcus aureus: I. Procedimientos experimentales y rastreo de cadenas". J. Biol. Chem . 246 (7): 2303–2316. doi : 10.1016/S0021-9258(19)77221-4 . PMID 5555571.
- http://www.thermoscientificbio.com/dna-and-rna-modifying-enzymes/micrococcal-nuclease/
- http://www.worthington-biochem.com/NFCP/default.html
- http://www.thermoscientificbio.com/uploadedFiles/Resources/en0181-usa-msds.pdf - Una hoja de datos de seguridad y material para el producto
- http://www.thermoscientificbio.com/uploadedFiles/Resources/en018-product-information.pdf - Hoja de información del producto
Enlaces externos
- Micrococcal+Nuclease en los encabezados de temas médicos (MeSH) de la Biblioteca Nacional de Medicina de EE. UU.
- CE 3.1.31.1
