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Los fibroblastos embrionarios de ratón ( MEF ) son un tipo de fibroblasto que se obtiene de embriones de ratón . Los MEF presentan una forma fusiforme cuando se cultivan in vitro , una característica típica de los fibroblastos. Los MEF se utilizan ampliamente en la investigación en ciencias de la vida, especialmente en biología de células madre .
El MEF es una línea celular limitada. Tras varias transmisiones, los MEF entran en senescencia y finalmente mueren. Sin embargo, los investigadores pueden utilizar diversas estrategias, como la infección viral o la transmisión repetida, para inmortalizar las células MEF, lo que permite que crezcan indefinidamente a pesar de algunos cambios en sus características. [ 1 ] [ 2 ]
Preparación y cultura
Para preparar MEF, se necesitan ratones hembra preñadas. Tras sacrificar a la ratona, el investigador debe realizar una incisión en su estómago y separar el embrión de la placenta en una cabina de bioseguridad . A continuación, se deben extraer el hígado y la cabeza. Los restos se digieren con enzimas para obtener células aisladas que se cultivan en placas de cultivo tisular . Las células MEF se pueden cultivar in vitro en medio DMEM con 10 % de FBS . Para transferir las MEF, los investigadores deben utilizar tripsina para digerir las células (haciendo que se desprendan de la superficie) y transferir 1/5 de las células digeridas a una nueva placa. [ 3 ] [ 1 ]
Aplicación en biología
En 1962, George Todaro y Howard Green, dos investigadores de la Universidad de Nueva York , inmortalizaron fibroblastos embrionarios de ratón (MEF) mediante transmisión repetida. Estas células se desarrollaron hasta convertirse en la línea celular NIH 3T3 , de uso común . [ 4 ]
Los MEF tratados con mitomicina o rayos gamma (dicho tratamiento hace que los MEF detengan la mitosis ) se utilizan ampliamente como células alimentadoras en cultivos de células madre embrionarias porque pueden imitar el microambiente en los embriones. [ 5 ]
En 2006, Shinya Yamanaka reprogramó MEF en iPSC mediante la introducción de 4 factores, lo cual es notable en el desarrollo de la biología de las células madre. [ 6 ]
Véase también
Referencias
- ^ a b Jian-ming Xu (2005). "Preparación, cultivo e inmortalización de fibroblastos embrionarios de ratón". Current Protocols in Molecular Biology . 28 (1): 1– 8.
- ^ Melissa M. St. Amand; John A. Hanover2; Joseph Shiloach1 (2016). "Una comparación de estrategias para inmortalizar fibroblastos embrionarios de ratón" . J Biol Methods . 3 (2): e41. doi : 10.14440/jbm.2016.110 . PMC 6706133. PMID 31453208 .
{{cite journal}}: CS1 maint: nombres numéricos: lista de autores ( enlace ) - ^ LANCTÔT. "PREPARACIÓN Y CONGELACIÓN DE FIBROBLASTOS EMBRIONARIOS DE RATÓN" (PDF) . Laboratorio LANCTÔT, MIT.
- ^ TODARO GJ, GREEN H (1963). "Estudios cuantitativos del crecimiento de células embrionarias de ratón en cultivo y su desarrollo en líneas establecidas" . J. Cell Biol . 17 (2): 299– 313. doi : 10.1083/jcb.17.2.299 . PMC 2106200. PMID 13985244 .
- ^ Regad T, Sayers T, Rees R, eds. (2015). Principios de la biología de las células madre y el cáncer: aplicaciones futuras y terapéutica . John Wiley & Sons. págs. 3–5 . ISBN 978-1-118-67062-0.
- ^ Kazutoshi Takahashi, Shinya Yamanaka (25 de agosto de 2006). "Inducción de células madre pluripotentes a partir de cultivos de fibroblastos embrionarios y adultos de ratón mediante factores definidos". Cell . 126 (4): 663– 676. doi : 10.1016/j.cell.2006.07.024 . hdl : 2433/159777 . PMID 16904174 .
- Líneas celulares de roedores