reacción en cadena de la polimerasa multiplex

La reacción en cadena de la polimerasa múltiple ( PCR múltiple ) se refiere al uso de la PCR para amplificar simultáneamente varias secuencias de ADN diferentes (como si se realizaran múltiples PCR separadas en un solo recipiente). Este proceso amplifica el ADN de las muestras utilizando múltiples cebadores y una ADN polimerasa termoactivada en un termociclador . El diseño de los cebadores para cada par debe optimizarse para que todos funcionen a la misma temperatura de hibridación durante la PCR.

La PCR múltiple se describió por primera vez en 1988 como un método para detectar deleciones en el gen de la distrofina . ^{[ 1 ]} También se ha utilizado con el gen de la esteroide sulfatasa . ^{[ 2 ]} En 2008, la PCR múltiple se utilizó para el análisis de microsatélites y SNP . ^{[ 3 ]} En 2020, se diseñaron ensayos de RT-PCR múltiple que combinaban múltiples genes diana de los Centros para el Control y la Prevención de Enfermedades en una sola reacción para aumentar la accesibilidad y el rendimiento de las pruebas moleculares para el diagnóstico del SARS-CoV-2 . ^{[ 4 ]}

La PCR múltiple consiste en el uso de múltiples conjuntos de cebadores en una única mezcla de PCR para producir amplicones de diferentes tamaños, específicos para distintas secuencias de ADN. Al analizar varias secuencias simultáneamente, se puede obtener información adicional en una sola prueba, información que de otro modo requeriría varias veces más reactivos y más tiempo. Las temperaturas de hibridación de cada conjunto de cebadores deben optimizarse para que funcionen correctamente en una sola reacción, y los tamaños de los amplicones, es decir, su longitud en pares de bases, deben ser lo suficientemente diferentes como para formar bandas distintas al visualizarlas mediante electroforesis en gel . Alternativamente, si los tamaños de los amplicones se superponen, estos pueden diferenciarse y visualizarse utilizando cebadores marcados con distintos colorantes fluorescentes. Existen kits comerciales de PCR múltiple disponibles, utilizados por muchos laboratorios forenses para amplificar muestras de ADN degradado.

Algunas de las aplicaciones de la PCR múltiple incluyen:

1. Identificación de patógenos ^{[ 5 ]}
2. Genotipado de SNP de alto rendimiento ^{[ 6 ]}
3. Análisis de mutaciones ^{[ 7 ]}
4. Análisis de eliminación de genes ^{[ 8 ]}
5. Cuantificación de plantillas ^{[ 9 ]}
6. Análisis de ligamiento ^{[ 10 ]}
7. Detección de ARN ^{[ 11 ]}
8. Estudios forenses ^{[ 12 ]}
9. Análisis de la dieta ^{[ 13 ]}