reacción en cadena de la polimerasa anidada

La reacción en cadena de la polimerasa anidada ( PCR anidada ) es una modificación de la reacción en cadena de la polimerasa destinada a reducir la unión no específica en los productos debido a la amplificación de sitios de unión de cebadores inesperados. ^{[ 1 ]}

La reacción en cadena de la polimerasa (PCR) es el proceso utilizado para amplificar muestras de ADN mediante una ADN polimerasa dependiente de temperatura . Los productos se pueden utilizar para secuenciación o análisis, y este proceso es fundamental en muchos laboratorios de investigación genética , además de utilizarse en la identificación genética forense y otros casos de genética humana. La PCR convencional requiere cebadores complementarios a los extremos del ADN diana. La cantidad de producto de la PCR aumenta con el número de ciclos de temperatura a los que se somete la reacción. Un problema frecuente es que los cebadores se unan a regiones incorrectas del ADN, generando productos inesperados. Este problema se vuelve más probable con un mayor número de ciclos de PCR.

La reacción en cadena de la polimerasa anidada (PCR anidada) utiliza dos conjuntos de cebadores en dos rondas sucesivas. El segundo conjunto amplifica una diana secundaria dentro del producto de la primera ronda, lo que permite un menor número de ciclos y limita la generación de productos inespecíficos. El segundo conjunto de cebadores anidados amplifica únicamente el producto deseado de la primera ronda, evitando la generación de productos inespecíficos. Esto permite realizar un mayor número de ciclos, minimizando la generación de productos inespecíficos. Este método resulta útil para plantillas poco frecuentes o PCR con alto ruido de fondo.

El ADN diana se somete a la primera reacción en cadena de la polimerasa con el primer conjunto de cebadores, que se muestra en verde. La selección de sitios de unión de cebadores alternativos y similares genera una selección de productos, de los cuales solo uno contiene la secuencia deseada.

El producto de la primera reacción se somete a una segunda reacción con el segundo conjunto de cebadores, que se muestra en rojo. Es muy improbable que alguno de los productos de PCR no deseados contenga sitios de unión para ambos cebadores nuevos, lo que garantiza que el producto de la segunda PCR tenga poca contaminación por productos no deseados.