Articulo de referencia

OD600

Espectrofotómetro para mediciones de DO600 y densidad celular. OD600 (también escrito como OD 600 , D 600 , od 600 , OD 600 ) es una abreviatura que indica la densidad óptica de...

Espectrofotómetro para mediciones de OD600 y densidad celular.
Espectrofotómetro para mediciones de DO600 y densidad celular.

OD600 (también escrito como OD 600 , D 600 , od 600 , OD 600 ) es una abreviatura que indica la densidad óptica de una muestra medida a una longitud de onda de 600  nm en un paso de luz de 1 cm (a menos que se indique lo contrario). Se usa comúnmente en microbiología para estimar la concentración de bacterias u otras células en un líquido, ya que la  longitud de onda de 600 nm tiene poco efecto sobre su crecimiento. OD 600 es un tipo de medición de turbidez . Dado que la densidad óptica en el caso de las mediciones de OD 600 resulta de la dispersión de la luz por partículas (células) en lugar de la absorción , el tamaño y la forma, así como las células muertas y los restos celulares, pueden contribuir a la disipación de la luz. Por lo tanto, distintos tipos de células que se encuentran a densidades del mismo nivel (por ejemplo, células/mL) pueden mostrar valores de OD 600 variables cuando se estiman con un instrumento similar.

Para muestras turbias como los cultivos celulares, el principal factor que contribuye a la densidad óptica medida es la dispersión de la luz y no la absorción molecular según la Ley de Beer-Lambert . Por lo tanto, las mediciones dependen de la configuración óptica del espectrofotómetro (distancia entre el portamuestras y la rendija de salida del instrumento, óptica del monocromador, geometría de la rendija, etc.); es muy probable que diferentes tipos de instrumentos tiendan a dar diferentes lecturas de OD 600 para la misma muestra turbia. [ 1 ]

La medición del cambio de la DO 600 en función del tiempo (por ejemplo, la medición de la curva de crecimiento ) puede indicar la fase de crecimiento de la población celular cultivada, es decir, si se encuentra en la fase de latencia, la fase logarítmica o la fase estacionaria. [ 2 ] Para la expresión y purificación de proteínas en bacterias, se recomienda que la inducción de proteínas y la recolección de células se realicen a una DO 600 específica (generalmente al final de la fase logarítmica, DO 600  =  0,4).

La absorbancia a 600 nm (OD 600) es preferible a la espectroscopia UV para medir el crecimiento de una población celular a lo largo del tiempo, ya que a esta longitud de onda las células no mueren como ocurriría con una radiación UV excesiva. También se ha demostrado que la radiación UV causa mutaciones de tamaño pequeño a mediano en bacterias, lo que podría alterar o destruir genes de interés. [ 3 ]

Referencias

  1. "Diferencia en las lecturas de OD600" . 10 de noviembre de 2020. Consultado el 4 de octubre de 2023 .
  2. Mandelstam J, McQuillen K, Dawes I (eds): Bioquímica del crecimiento bacteriano. 3.ª ed. Blackwell, Oxford, 1982.
  3. Sutton, Scott. "Medición de la concentración celular en suspensión mediante densidad óptica" . microbiologynetwork.com . The Microbiology Network . Consultado el 26 de septiembre de 2019 .

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