orto -nitrofenil-β-galactósido

El orto -nitrofenil-β-galactósido ( ONPG ) es un sustrato colorimétrico y espectrofotométrico para la detección de laactividad de la β-galactosidasa . ^{[ 1 ]} Este compuesto normalmente es incoloro. Sin embargo, si la β-galactosidasa está presente, hidroliza la molécula de ONPG en galactosa y orto-nitrofenol . Este último compuesto tiene un color amarillo que puede utilizarse para comprobar la actividad enzimática mediante un ensayo colorimétrico (a una longitud de onda de 420nm). La β-galactosidasa es necesaria para la utilización de la lactosa , por lo que la intensidad del color producido puede utilizarse como medida de la velocidad enzimática. 

Aunque el ONPG imita a la lactosa y es hidrolizado por la β-galactosidasa, no puede actuar como inductor del operón lac . Sin otro análogo de la lactosa que pueda actuar como inductor, como el isopropil β- D -1-tiogalactopiranósido (IPTG), la β-galactosidasa no se transcribirá y el ONPG no se hidrolizará.