Anticuerpos primarios y secundarios

Los anticuerpos primarios y secundarios son dos grupos de anticuerpos que se clasifican según si se unen directamente a antígenos o proteínas o si se dirigen a otro anticuerpo (primario) que, a su vez, está unido a un antígeno o proteína .

Un anticuerpo primario puede ser muy útil para la detección de biomarcadores de enfermedades como el cáncer, la diabetes, la enfermedad de Parkinson y la enfermedad de Alzheimer, y se utiliza para el estudio de la absorción, distribución, metabolismo y excreción (ADME) y la resistencia a múltiples fármacos (MDR) de los agentes terapéuticos.

Los anticuerpos secundarios proporcionan detección y amplificación de la señal, además de extender la utilidad de un anticuerpo mediante la conjugación con proteínas. ^{[ 1 ]} Los anticuerpos secundarios son especialmente eficientes en el inmunomarcaje . Los anticuerpos secundarios se unen a los anticuerpos primarios, que están directamente unidos al antígeno o antígenos diana. En el inmunomarcaje, el dominio Fab del anticuerpo primario se une a un antígeno y expone su dominio Fc al anticuerpo secundario. Luego, el dominio Fab del anticuerpo secundario se une al dominio Fc del anticuerpo primario. Dado que el dominio Fc es constante dentro de la misma clase animal, solo se requiere un tipo de anticuerpo secundario para unirse a muchos tipos de anticuerpos primarios. Esto reduce el costo al marcar solo un tipo de anticuerpo secundario, en lugar de marcar varios tipos de anticuerpos primarios. Los anticuerpos secundarios ayudan a aumentar la sensibilidad y la amplificación de la señal debido a que múltiples anticuerpos secundarios se unen a un anticuerpo primario. ^{[ 2 ]}

Los anticuerpos secundarios de molécula completa de inmunoglobulina son el formato más utilizado, pero pueden procesarse enzimáticamente para permitir el refinamiento del ensayo. Los fragmentos F(ab') _₂ se generan mediante digestión con pepsina para eliminar la mayor parte del fragmento Fc, lo que evita el reconocimiento por los receptores Fc en células vivas, o por la proteína A o la proteína G. [ ^{3 ] La} digestión con papaína genera fragmentos Fab, que eliminan todo el fragmento Fc, incluida la región bisagra, produciendo dos fragmentos Fab monovalentes. Estos pueden utilizarse para bloquear inmunoglobulinas endógenas en células, tejidos u otras superficies, y para bloquear las inmunoglobulinas expuestas en experimentos de marcaje múltiple utilizando anticuerpos primarios de la misma especie. ^{[ 4 ]}