Hibridoma de conejo

Un hibridoma de conejo es una línea celular híbrida formada por la fusión de una célula B de conejo productora de anticuerpos con una célula B cancerosa ( mieloma ).

Se ha documentado que el sistema inmunitario del conejo es un vehículo para desarrollar anticuerpos con mayor afinidad y un reconocimiento más diverso de muchas moléculas, incluidos fosfopéptidos, carbohidratos e inmunógenos que no son inmunogénicos en el ratón. ^{[ 1 ]} Sin embargo, hasta hace poco, el tipo de anticuerpos disponibles del conejo se había limitado en alcance a anticuerpos policlonales . Se hicieron varios esfuerzos para generar anticuerpos monoclonales de conejo después del desarrollo de la tecnología de hibridomas de ratón en la década de 1970. ^{[ 2 ]} Se llevó a cabo investigación en heterohibridomas de ratón-conejo para hacer anticuerpos monoclonales de conejo. ^{[ 1 ] [ 3 ]} Sin embargo, estos heterohibridomas fueron finalmente difíciles de clonar, y los clones, generalmente inestables, y no secretaban anticuerpos durante un período prolongado de tiempo.

En 1995, Katherine Knight y sus colegas de la Universidad Loyola de Chicago lograron desarrollar un conejo doblemente transgénico que sobreexpresaba los oncogenes v-abl y c-myc bajo el control de los potenciadores de las cadenas pesadas y ligeras de la inmunoglobulina. El conejo desarrolló un tumor similar al mieloma, lo que permitió aislar una línea celular de plasmocitoma denominada 240E-1. La fusión de células 240E-1 con linfocitos de conejo produjo hibridomas que secretaban anticuerpos monoclonales de conejo de manera consistente. ^{[ 4 ]} Sin embargo, al igual que con las primeras líneas de mieloma de ratón desarrolladas en la década de 1970, la estabilidad era un problema. Varios laboratorios que habían recibido la línea celular 240E-1 del laboratorio de la Dra. Knight informaron problemas de estabilidad con la línea celular de fusión 240E-1. ^{[ 5 ]}

En 1996, Weimin Zhu y Robert Pytela, de la Universidad de California en San Francisco (UCSF), obtuvieron la línea celular 240E-1 del laboratorio del Dr. Knight e intentaron desarrollar un hibridoma de conejo mejorado. ^{[ 4 ]} Las mejoras en las características de la línea 240E-1 se lograron mediante subclonación repetida, selección para alta eficiencia de fusión, crecimiento robusto y características morfológicas como una apariencia brillante bajo un microscopio de contraste de fases . Los subclones seleccionados se probaron además para determinar su capacidad de producir un hibridoma estable y la secreción de anticuerpos monoclonales. Después de múltiples rondas de subclonación y procesos de selección, se identificó una nueva línea celular llamada 240E-W, que expresó una mejor eficiencia de fusión y estabilidad. Desde entonces, la línea celular 240E-W se ha desarrollado y optimizado para la producción de anticuerpos monoclonales de conejo para investigación y aplicaciones comerciales.

El proceso de formación de hibridomas en conejos comienza con la obtención de células B de un conejo inmunizado. Existen numerosos protocolos de inmunización para conejos, especialmente para la generación de anticuerpos policlonales. ^{[ 6 ] [ 7 ] [ 8 ]} Tras la inmunización, las células B se fusionan con una línea celular candidata de conejo para formar hibridomas. Los anticuerpos resultantes de los hibridomas se analizan para detectar un antígeno que cumpla los criterios de interés mediante pruebas diagnósticas como ELISA , Western blot , inmunohistoquímica y FACS. Los hibridomas resultantes pueden subclonarse para asegurar características monoclonales.

Mitchell Ho e Ira Pastan del Instituto Nacional del Cáncer (Bethesda, EE. UU.) aislaron un grupo de anticuerpos monoclonales de conejo (p. ej., YP218, YP223) que reconocen epítopos raros de mesotelina , incluyendo sitios poco inmunogénicos cerca del extremo C terminal, para la terapia del cáncer. ^{[ 9 ]} El laboratorio del Dr. Ho analizó las estructuras complejas de los anticuerpos de conejo con sus antígenos del Protein Data Bank e identificó residuos que contactan con el antígeno en el Fv del conejo dentro de una distancia de 6 Angstrom a su antígeno. ^{[ 10 ]} Denominaron "HV4" y "LV4", bucles de la región determinante de la no complementariedad (CDR) que están estructuralmente cerca del antígeno y se encuentran en el marco 3 de la cadena pesada y la cadena ligera del conejo, respectivamente. Basándose en el modelado estructural computacional, Ho y Zhang diseñaron una estrategia de humanización mediante el injerto de los CDR combinados de Kabat/IMGT/Paratome en una secuencia marco de la línea germinal humana. Las inmunotoxinas compuestas por los Fv de conejo humanizados (p. ej., hYP218) fusionados a una toxina de uso clínico mostraron una citotoxicidad más fuerte contra las células tumorales que las inmunotoxinas derivadas de sus Fv de conejo originales. Las células T CAR basadas en el anticuerpo hYP218 también muestran una inhibición efectiva del crecimiento tumoral en ratones. ^{[ 11 ]} El método (es decir, el injerto de CDR de conejo combinados de Kabat/IMGT/Paratome en un marco de línea germinal humana estable) se ha sugerido como un enfoque general para humanizar anticuerpos de conejo. ^{[ 10 ]}

• Entrada de Cellosaurus para 240E-1
• Entrada de Cellosaurus para 240E-W