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Articulo de referencia

Radioinmunoensayo

Un radioinmunoensayo ( RIA ) es un inmunoensayo que utiliza moléculas radiomarcadas en la formación gradual de inmunocomplejos . El RIA es una técnica de ensayo in vitro muy sen...

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Un radioinmunoensayo ( RIA ) es un inmunoensayo que utiliza moléculas radiomarcadas en la formación gradual de inmunocomplejos . El RIA es una técnica de ensayo in vitro muy sensible que se utiliza para medir concentraciones de sustancias, generalmente concentraciones de antígenos (por ejemplo, niveles hormonales en sangre ) mediante el uso de anticuerpos .

La técnica RIA es extremadamente sensible y específica , y aunque requiere equipo especializado, sigue siendo uno de los métodos menos costosos para realizar este tipo de mediciones. Requiere precauciones especiales y licencias, ya que se utilizan sustancias radiactivas.

En cambio, un inmunoensayo radiométrico (IRMA) es un inmunoensayo que utiliza moléculas radiomarcadas, pero de forma inmediata en lugar de por etapas.

Una prueba de radioalergoabsorción (RAST) es un ejemplo de radioinmunoensayo. Se utiliza para detectar el alérgeno causante de una alergia .

Método

Clásicamente, para realizar un radioinmunoensayo, se hace radiactiva una cantidad conocida de un antígeno , frecuentemente marcándolo con isótopos radiactivos de yodo gamma , como 125-I , o tritio unido a tirosina . [ 1 ] Este antígeno radiomarcado se mezcla con una cantidad conocida de anticuerpo para ese antígeno, y como resultado, ambos se unen específicamente entre sí. Luego, se agrega una muestra de suero de un paciente que contiene una cantidad desconocida de ese mismo antígeno. Esto hace que el antígeno no marcado (o "frío") del suero compita con el antígeno radiomarcado ("caliente") por los sitios de unión del anticuerpo. A medida que aumenta la concentración de antígeno "frío", más se une al anticuerpo, desplazando la variante radiomarcada y reduciendo la proporción de antígeno radiomarcado unido al anticuerpo con respecto al antígeno radiomarcado libre. Los antígenos unidos se separan y la radiactividad del antígeno libre (no unido) que queda en el sobrenadante se mide utilizando un contador gamma . Este valor se compara posteriormente con una curva de calibración estandarizada para determinar la concentración del antígeno no marcado en la muestra de suero del paciente.

Este método puede utilizarse, en principio, para cualquier molécula biológica y no se limita a los antígenos séricos, ni requiere el uso del método indirecto de medición del antígeno libre en lugar de la medición directa del antígeno capturado. Por ejemplo, si no es deseable o posible radiomarcar el antígeno o la molécula diana de interés, se puede realizar un radioinmunoensayo (RIA) si se dispone de dos anticuerpos diferentes que reconozcan la molécula diana y esta es lo suficientemente grande (por ejemplo, una proteína) como para presentar múltiples epítopos a los anticuerpos. Un anticuerpo se radiomarcaría como se describió anteriormente, mientras que el otro permanecería sin modificar. El RIA comenzaría permitiendo que el anticuerpo "frío" sin marcar interactúe y se una a la molécula diana en solución. Preferiblemente, este anticuerpo sin marcar se inmoviliza de alguna manera, como acoplado a una microesfera de agarosa , recubierto sobre una superficie, etc. A continuación, se permite que el anticuerpo "caliente" radiomarcado interactúe con el primer complejo anticuerpo-molécula diana. Tras un lavado exhaustivo, se mide la cantidad directa de anticuerpo radiactivo unido y se cuantifica la cantidad de molécula diana comparándola con una cantidad de referencia analizada simultáneamente. Este método es similar en principio al método ELISA sándwich no radiactivo . [ 2 ]

Historia

Este método fue desarrollado por Solomon Berson y Rosalyn Sussman Yalow en el Hospital de la Administración de Veteranos en el Bronx , Nueva York. [ 3 ] [ 4 ] Este desarrollo revolucionario le valió a la Dra. Yalow el Premio Nobel de Medicina en 1977, siendo la segunda mujer en ganarlo. [ 5 ] En su discurso de aceptación, la Dra. Yalow dijo: «El mundo no puede permitirse la pérdida del talento de la mitad de su población si queremos resolver los numerosos problemas que nos aquejan». [ 6 ] Yalow compartió el Premio Nobel con Roger Guillemin y Andrew Schally, quienes lo obtuvieron por su investigación sobre «la producción de hormonas peptídicas del cerebro». [ 5 ]

Referencias

  1. ↑ "2.30: Radioinmunoensayo (RIA)" . Medicine LibreTexts . 22-11-2020 . Consultado el 28-11-2025 .
  2. ↑ Smith, John (2006). "Radioinmunoensayo en solución de proteínas y péptidos". Current Protocols in Molecular Biology . Capítulo 10: Unidad 10.24. doi : 10.1002/0471142727.mb1024s74 . PMID 18265372. S2CID 20458546 .  
  3. ↑ Berson, Solomon A., et al. "Metabolismo de la insulina-I 131 en sujetos humanos: demostración de la globulina fijadora de insulina en la circulación de sujetos tratados con insulina." The Journal of clinical investigation 35.2 (1956): 170-190.
  4. ↑ Berson, Solomon A., y Rosalyn S. Yalow. "Aspectos cuantitativos de la reacción entre la insulina y el anticuerpo de unión a la insulina". The Journal of clinical investigation 38.11 (1959): 1996-2016.
  5. 1 2 "El Premio Nobel de Fisiología o Medicina de 1977" . NobelPrize.org . Consultado el 13 de octubre de 2020 .
  6. ↑ Vare, Ethlie Ann; Ptacek, Greg (2002). Patently female : from AZT to TV dinners : stories of women inventors and their breakthrough ideas . Nueva York: Wiley. p. 99. ISBN    0471023345.

pasos en la técnica de radioinmunoanálisis