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Ingeniería genómica mediada por AAV recombinante

La ingeniería genómica basada en virus adenoasociados recombinantes ( rAAV )es unaplataforma de edición genómica centrada en el uso de vectores AAV recombinantes que permite la ...

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La ingeniería genómica basada en virus adenoasociados recombinantes ( rAAV )es unaplataforma de edición genómica centrada en el uso de vectores AAV recombinantes que permite la inserción, eliminación o sustitución de secuencias de ADN en los genomas de células de mamíferos vivas. Esta técnica se basa en eldescubrimientode Mario Capecchi y Oliver Smithies , galardonados con el Premio Nobel, de que la recombinación homóloga (RH), un mecanismo natural de reparación del ADN de alta fidelidad, puede aprovecharse para realizar alteraciones genómicas precisas en ratones. La edición genómica mediada por rAAV mejora la eficiencia de esta técnica, permitiendo la ingeniería genómica en cualquier línea celular humana preestablecida y diferenciada, la cual, a diferencia de las células madre embrionarias de ratón, presenta bajas tasas de RH.

Esta técnica se ha adoptado ampliamente para la ingeniería de líneas celulares humanas con el fin de generar modelos isogénicos de enfermedades humanas . También se ha utilizado para optimizar líneas celulares bioproductoras para la biofabricación de vacunas y terapias proteicas. Además, debido a la naturaleza no patógena del rAAV, se ha consolidado como un vector idóneo para la terapia génica en pacientes vivos.

Vector rAAV

Diagrama de un vector rAAV típico [ 1 ]

El genoma del rAAV está compuesto de ácido desoxirribonucleico monocatenario (ssDNA), de sentido positivo o negativo, con una longitud aproximada de 4,7 kilobases. Estos vectores virales de ADN monocatenario presentan altas tasas de transducción y poseen la propiedad única de estimular la recombinación homóloga endógena sin causar roturas de doble cadena en el genoma, a diferencia de otros métodos de edición genómica mediados por endonucleasas de homing .

Capacidades

Los usuarios pueden diseñar un vector rAAV para cualquier locus genómico objetivo y realizar alteraciones genéticas endógenas, tanto generales como sutiles, en tipos de células somáticas de mamíferos. Esto incluye la eliminación de genes para genómica funcional o la inserción de etiquetas proteicas para rastrear eventos de translocación a niveles fisiológicos en células vivas. Lo más importante es que rAAV se dirige a un solo alelo a la vez y no produce alteraciones genómicas fuera del objetivo. [ 2 ] Gracias a esto, puede modelar de forma rutinaria y precisa enfermedades genéticas causadas por polimorfismos de un solo nucleótido (SNP) sutiles o mutaciones puntuales, que son cada vez más el objetivo de nuevos programas de descubrimiento de fármacos. [ 2 ]

Aplicaciones

Hasta la fecha, el uso de la ingeniería genómica mediada por rAAV se ha publicado en más de 2100 revistas científicas revisadas por pares. [ 3 ] Otra aplicación emergente de la edición genómica basada en rAAV es la terapia génica en pacientes, debido a la precisión y la ausencia de eventos de recombinación fuera de objetivo que ofrece este enfoque.

Véase también

Referencias

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