Hispanopedia WikiLa integración mediada por enzimas de restricción (abreviada como REMI ) es una técnica para integrar ADN ( plásmido linealizado ) en los sitios del genoma generados por la misma enzima de restricción utilizada para la linealización del ADN. [ 1 ] La integración del plásmido ocurre en los sitios correspondientes del genoma , a menudo regenerando los sitios de reconocimiento con la misma enzima de restricción utilizada para la linealización del plásmido.
Mecanismo
La enzima de restricción específica corta el ADN genómico en puntos aleatorios y genera sitios de reconocimiento. [ 2 ] El fragmento de ADN que se va a insertar se linealiza utilizando dicha enzima de restricción y la mezcla se inyecta en la célula, tras lo cual se produce una inserción exitosa del fragmento de ADN. [ 3 ]
Aplicaciones
El método REMI se ha utilizado para generar organismos genéticamente modificados , incluyendo Saccharomyces cerevisiae , Dictyostelium discoideum y Xenopus laevis . [ 1 ] [ 4 ] [ 5 ]
Ingeniería genómica
REMI se ha utilizado para la transgénesis a gran escala en embriones de X. laevis con el fin de estudiar diversas vías de señalización, incluyendo el FGF y el sistema tiroideo . [ 3 ] [ 6 ]
Referencias
- 1 2 Schiestl, RH; Petes, TD (1991-09-01). "Integración de fragmentos de ADN por recombinación ilegítima en Saccharomyces cerevisiae" . Actas de la Academia Nacional de Ciencias de los Estados Unidos de América . 88 (17): 7585– 7589. Bibcode : 1991PNAS...88.7585S . doi : 10.1073/pnas.88.17.7585 . ISSN 0027-8424 . PMC 52346. PMID 1881899 .
- ↑ Kessler, C.; Manta, V. (1990-08-16). "Especificidad de las endonucleasas de restricción y las metiltransferasas de modificación del ADN: una revisión (Edición 3)". Gene . 92 ( 1–2 ): 1–248 . doi : 10.1016/0378-1119(90)90486-b . ISSN 0378-1119 . PMID 2172084 .
- 1 2 Kroll, KL; Amaya, E. (1996-10-01). "Embriones transgénicos de Xenopus provenientes de trasplantes nucleares de esperma revelan los requisitos de señalización de FGF durante la gastrulación". Development . 122 (10): 3173– 3183. doi : 10.1242/dev.122.10.3173 . ISSN 0950-1991 . PMID 8898230 . S2CID 20349983 .
- ↑ Kuspa, A.; Loomis, WF (1992-09-15). "Etiquetado de genes de desarrollo en Dictyostelium mediante la integración de ADN plasmídico mediada por enzimas de restricción" . Actas de la Academia Nacional de Ciencias de los Estados Unidos de América . 89 (18): 8803– 8807. Bibcode : 1992PNAS...89.8803K . doi : 10.1073/pnas.89.18.8803 . ISSN 0027-8424 . PMC 50009. PMID 1326764 .
- ↑ Sparrow, Duncan B.; Latinkic, Branko; Mohun, Tim J. (2000-02-15). "Un método simplificado para generar Xenopus transgénico" . Nucleic Acids Research . 28 (4): e12. doi : 10.1093/nar/28.4.e12 . ISSN 0305-1048 . PMC 102591. PMID 10648800 .
- ↑ Turque, Nathalie; Palmier, Karima; Le Mével, Sébastien; Alliot, Caroline; Demeneix, Barbara A. (2005-11-01). "Un protocolo fisiológico rápido para probar los efectos transcripcionales de los agentes disruptores de la tiroides en renacuajos premetamórficos de Xenopus" . Environmental Health Perspectives . 113 (11): 1588– 1593. doi : 10.1289/ehp.7992 . ISSN 0091-6765 . PMC 1310923. PMID 16263516 .
- ADN
