Fragmento de restricción

En biología molecular , un fragmento de restricción es un fragmento de ADN resultante del corte de una cadena de ADN por una enzima de restricción (endonucleasa de restricción). ^{[ 1 ]} Cada enzima de restricción es altamente específica, reconoce una secuencia corta de ADN particular (un sitio de restricción ) y corta ambas cadenas de ADN en puntos específicos dentro de este sitio. La mayoría de los sitios de restricción son palindrómicos (es decir, la secuencia de nucleótidos es la misma en ambas cadenas cuando se lee en la dirección 5' a 3' de cada cadena) y tienen de cuatro a ocho nucleótidos de longitud. Se producen muchos cortes por una enzima de restricción debido a la repetición aleatoria de estas secuencias en una molécula de ADN larga, lo que produce un conjunto de fragmentos de restricción. Una molécula de ADN particular siempre producirá el mismo conjunto de fragmentos de restricción cuando se exponga a la misma enzima de restricción. Los fragmentos de restricción se pueden analizar utilizando técnicas como la electroforesis en gel o se pueden utilizar en la tecnología del ADN recombinante . ^{[ 2 ]}

En la tecnología del ADN recombinante, se utilizan endonucleasas de restricción específicas que aíslan un gen concreto y cortan la cadena principal de azúcar-fosfato en diferentes puntos (manteniendo la simetría), de modo que los fragmentos de restricción de doble cadena tienen extremos de cadena simple. Estas extensiones cortas, llamadas extremos cohesivos , pueden formar pares de bases mediante enlaces de hidrógeno con extremos cohesivos complementarios en cualquier otro ADN cortado con la misma enzima (como un plásmido bacteriano).

En la electroforesis en gel de agarosa , los fragmentos de restricción generan un patrón de bandas característico de la molécula de ADN original y de la enzima de restricción utilizada. Por ejemplo, las moléculas de ADN relativamente pequeñas de virus y plásmidos pueden identificarse simplemente por sus patrones de fragmentos de restricción. Si las diferencias de nucleótidos entre dos alelos distintos se producen dentro del sitio de restricción de una enzima específica, la digestión de segmentos de ADN de individuos con alelos diferentes para ese gen en particular, utilizando dicha enzima, producirá fragmentos diferentes, cada uno de los cuales generará patrones de bandas distintos en la electroforesis en gel.