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Articulo de referencia

SYBR Verde I

32 H 37 N 4 S + \n| MolarMass = 509.73{{nbsp}}[[gram|g]]/[[mole (unit)|mol]]\n| Appearance = \n| Density = \n| MeltingPt = \n| BoilingPt = \n| SolubleOther = Normally supplied s...

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SYBR Green I ( SG ) es un colorante de cianina asimétrico [ 1 ] utilizado como tinción de ácidos nucleicos en biología molecular . La familia de colorantes SYBR es producida por Molecular Probes Inc. , ahora propiedad de Thermo Fisher Scientific . SYBR Green I se une al ADN . El complejo ADN-colorante resultante absorbe mejor la luz azul de 497 nanómetros (λ máx = 497 nm) y emite luz verde (λ máx = 520 nm). La tinción se une preferentemente al ADN de doble cadena, pero también tiñe el ADN de cadena simple (ssDNA) con menor eficacia. SYBR Green también puede teñir el ARN con menor eficacia que el ssDNA.  

Una muestra de esperma de arenque teñida con SYBR Green en una cubeta iluminada con luz azul en un microscopio de epifluorescencia . El SYBR Green en la muestra se une al ADN del esperma y, una vez unido, emite fluorescencia, emitiendo luz verde cuando se ilumina con luz azul.
Espectrograma de SYBR Green I

Usos

El SYBR Green se utiliza en diversas áreas de la bioquímica y la biología molecular . Se emplea como colorante para la cuantificación de ADN de doble cadena en algunos métodos de PCR cuantitativa . [ 2 ] También se utiliza para visualizar el ADN en electroforesis en gel . Se pueden emplear concentraciones más altas de SYBR Green para teñir geles de agarosa y visualizar el ADN presente. Además de marcar ácidos nucleicos puros, el SYBR Green también se puede utilizar para marcar el ADN dentro de las células para citometría de flujo y microscopía de fluorescencia . En estos casos, puede ser necesario un tratamiento con RNasa para reducir el ruido de fondo del ARN en las células.

Se publicó un estudio exhaustivo de colorantes de ADN basados ​​en naranja de tiazol, que incluyó SYBR Safe, SYBR Green, PicoGreen, SYTO-16, SYTO-9 y un nuevo derivado, TOPhBu. En dicho estudio, se publicaron las síntesis de estos compuestos y se caracterizaron espectroscópicamente para cuantificar su aumento de fluorescencia al unirse al ADN de doble cadena. La capacidad de los colorantes para detectar ADN a bajas concentraciones se evaluó utilizando dos nuevas métricas: aumento absoluto de fluorescencia (AFE) y aumento relativo de fluorescencia (RFE). Se probaron en experimentos de qPCR, mostrando algunas diferencias importantes en la sensibilidad y la eficiencia de la qPCR, lo que facilita la selección de marcadores de ADN para fines analíticos. [ 3 ] El estudio concluyó que Sybr Green exhibe el mayor aumento de fluorescencia (AFE) y proporciona la mejor característica para los métodos de PCR. El segundo mejor entre los colorantes estudiados fue TOPhBu, con un rendimiento analítico similar al de Sybr Green.

Seguridad

SYBR Green I se comercializa como sustituto del bromuro de etidio , un posible mutágeno para los humanos , ya que es más seguro de usar y no genera los complejos problemas de eliminación de residuos asociados al bromuro de etidio. Sin embargo, cualquier molécula pequeña capaz de unirse al ADN con alta afinidad es un posible carcinógeno , incluido SYBR Green.

En un estudio que utilizó la prueba de Ames , que mide la capacidad de los químicos para causar mutaciones, cuando se analizó a la misma concentración, el SYBR Green I fue aproximadamente 30 veces menos mutagénico que el bromuro de etidio. [ 4 ]

Tintes de cianina similares

Véase también

Referencias

  1. ↑ Zipper H; Brunner H; Bernhagen J; Vitzthum F (2004). "Investigaciones sobre la intercalación de ADN y la unión a la superficie por SYBR Green I, su determinación estructural e implicaciones metodológicas" . Nucleic Acids Research . 32 (12): e103. doi : 10.1093/nar/gnh101 . PMC 484200. PMID 15249599 .  
  2. ↑ Mackay IM; Arden KE; Nitsche A (marzo de 2002). "PCR en tiempo real en virología" . Nucleic Acids Res . 30 (6): 1292– 305. doi : 10.1093/ nar /30.6.1292 . PMC 101343. PMID 11884626 .  
  3. ^ Domahidy, Farkas; Kovács, Beatriz; Cseri, Levente; Katona, Gergely; Rózsa, Balázs; et al. (19 de junio de 2024). "Estudio integral de tintes de ADN a base de tiazol-naranja" . ChemPhotoChem . doi : 10.1002/cptc.202400080 . ISSN 2367-0932 .   Este artículo incorpora texto de esta fuente, que está disponible bajo la licencia CC BY 4.0 .
  4. ↑ Singer VL; Lawlor TE; Yue S (febrero de 1999). "Comparación de la mutagenicidad de la tinción de gel de ácido nucleico SYBR Green I y la mutagenicidad del bromuro de etidio en el ensayo de mutación inversa de Salmonella/microsomas de mamíferos (prueba de Ames)". Mutation Research . 439 (1): 37– 47. Bibcode : 1999MRGTE.439...37S . doi : 10.1016/s1383-5718(98)00172-7 . PMID 10029672 .