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Articulo de referencia

1-Fluoro-2,4-dinitrobenceno

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El 1-fluoro-2,4-dinitrobenceno (conocido comúnmente como reactivo de Sanger , dinitrofluorobenceno , DNFB o FDNB ) es una sustancia química que reacciona con el aminoácido N-terminal de los polipéptidos . Esto puede ser útil para la secuenciación de proteínas .

Preparación

En 1936, Gottlieb presentó una síntesis en la que el 1-cloro-2,4-dinitrobenceno reaccionó con fluoruro de potasio (KF) en nitrobenceno : [ 3 ]

Síntesis de 1-fluoro-2,4-dinitrobenceno a partir de 1-cloro-2,4-dinitrobenceno en nitrobenceno con fluoruro de potasio.

Usos

Frederick Sanger

En 1945, Frederick Sanger describió su uso para determinar el aminoácido N-terminal en cadenas polipeptídicas, en particular la insulina . [ 4 ] Los resultados iniciales de Sanger sugirieron que la insulina era una molécula más pequeña de lo que se había estimado previamente (peso molecular 12 000) y que constaba de cuatro cadenas (dos que terminaban en glicina y dos que terminaban en fenilalanina ), con las cadenas entrecruzadas por enlaces disulfuro . Sanger continuó trabajando en la insulina, utilizando dinitrofluorobenceno en combinación con otras técnicas, lo que finalmente dio como resultado la secuencia completa de la insulina (que consta de solo dos cadenas, con un peso molecular de 6 000). [ 5 ]

Tras el informe inicial de Sanger sobre el reactivo, el método del dinitrofluorobenceno se adoptó ampliamente para el estudio de proteínas, hasta que fue reemplazado por otros reactivos para el análisis terminal (por ejemplo, cloruro de dansilo y posteriormente aminopeptidasas y carboxipeptidasas ) y otros métodos generales para la determinación de secuencias (por ejemplo, degradación de Edman ). [ 5 ]

El dinitrofluorobenceno reacciona con el grupo amino de los aminoácidos para producir aminoácidos dinitrofenilados . Estos aminoácidos DNP son moderadamente estables en condiciones de hidrólisis ácida que rompen los enlaces peptídicos . Los aminoácidos DNP pueden recuperarse y su identidad puede determinarse mediante cromatografía . Más recientemente, el reactivo de Sanger también se ha utilizado para el análisis, bastante complejo, de la distinción entre las formas reducidas y oxidadas del glutatión y la cisteína en sistemas biológicos, en combinación con HPLC. Este método es lo suficientemente robusto como para poder realizarse en matrices complejas como la sangre o el lisado celular. [ 6 ] [ 7 ]

Método de Sanger para el análisis del grupo terminal de péptidos: A) Derivatización del extremo N -terminal con el reactivo de Sanger (DNFB), B) hidrólisis ácida total del péptido dinitrofenilo.

Véase también

Referencias

  1. 1 2 Hoja de datos de seguridad de Oxford
  2. 1 2 3 Manual CRC de Química y Física , 90.ª edición, CRC Press, Boca Raton, Florida, 2009, ISBN 978-1-4200-9084-0, Sección 3, Constantes físicas de los compuestos orgánicos , pág.  3-260.
  3. ↑ Billroth Gottlieb, Hans (1936). "La sustitución del cloro por flúor en compuestos orgánicos". J. Am. Chem. Soc. 58 (3): 532– 533. doi : 10.1021/ja01294a502 .
  4. ↑ Sanger, F (1945). "Los grupos amino libres de la insulina" . The Biochemical Journal . 39 (5): 507– 15. doi : 10.1042/bj0390507 . PMC 1258275. PMID 16747948 .  
  5. 1 2 Joseph Fruton , Proteínas, enzimas, genes: la interacción entre química y biología . New Haven: Yale University Press, 1999. pág. 216.
  6. ↑ Dominick, Pamela K.; Cassidy, Pamela B.; Roberts, Jeanette C. (2001). "Un método nuevo y versátil para la determinación de tiolaminas de importancia biológica". Journal of Chromatography B: Biomedical Sciences and Applications . 761 (1): 1– 12. doi : 10.1016/S0378-4347(01)00298-5 . PMID 11585123 . 
  7. ↑ Bronowicka-Adamska, Patrycja; Zagajewski, Jacek; Czubak, Jerzy; Wróbel, Maria (2011). "Método RP-HPLC para la determinación cuantitativa de cistationina, cisteína y glutatión: una aplicación para el estudio del metabolismo de la cisteína en el cerebro humano". Journal of Chromatography B . 879 (21): 2005– 2009. doi : 10.1016/j.jchromb.2011.05.026 . PMID 21665555 . 

Literatura

  • Schaefer, T. (1962). "El espectro de resonancia magnética de protones del 1-fluoro-2,4-dinitrobenceno" . Revista canadiense de química . 40 (3): 431– 433. doi : 10.1139/v62-068 .
  • Nageswara Rao, BD (1964). "Los espectros de resonancia de 1H y 19F del 1-fluoro-2,4-dinitrobenceno". Física Molecular . 7 (4): 307– 310. Bibcode : 1964MolPh...7..307N . doi : 10.1080/00268976300101071 .
  • Wilkins, A.; Small, RWH (1991). "Estructura del 1-fluoro-2,4-dinitrobenceno". Acta Crystallographica Sección C. 47 ( 1): 220– 221. Bibcode : 1991AcCrC..47..220W . doi : 10.1107/S0108270190007326 .
  • Fluorodinitrobenceno – 1-fluoro-2,4-dinitrobenceno (wikigenes.org)