Mutagénesis con marcadores de firma

La mutagénesis dirigida ( STM ) es una técnica genética utilizada para estudiar la función de los genes . Los recientes avances en la secuenciación del genoma nos han permitido catalogar una gran variedad de genomas de organismos, pero la función de los genes que contienen aún se desconoce en gran medida. Mediante STM, se puede inferir la función del producto de un gen específico al desactivarlo y observar su efecto en el organismo. El uso original y más común de STM consiste en descubrir qué genes de un patógeno están implicados en la virulencia en su huésped , lo que contribuye al desarrollo de nuevas terapias y fármacos.

El gen en cuestión se inactiva mediante mutación por inserción ; se utiliza un transposón que se inserta en la secuencia genética. Cuando este gen se transcribe y se traduce en una proteína, la inserción del transposón afecta la estructura proteica y (en teoría) impide su funcionamiento. En la técnica STM, los mutantes se crean mediante la inserción aleatoria de transposones, y cada transposón contiene una secuencia de "etiqueta" diferente que lo identifica de forma única. Si una bacteria mutante por inserción presenta un fenotipo de interés, como la susceptibilidad a un antibiótico al que antes era resistente , su genoma puede secuenciarse y analizarse (mediante un ordenador) para detectar cualquiera de las etiquetas utilizadas en el experimento. Al localizar una etiqueta, también se localiza el gen que interrumpe (que se encuentra en algún punto entre un codón de inicio y un codón de parada , que marcan los límites del gen).

La microscopía de seguimiento de señales (STM) permite descubrir qué genes son cruciales para la virulencia de un patógeno mediante la inyección de una mezcla de diferentes mutantes aleatorios en un modelo animal (por ejemplo, un modelo de infección en ratones) y la observación de cuáles de estos mutantes sobreviven y proliferan en el huésped. Los patógenos mutantes que no sobreviven en el huésped deben tener un gen inactivado, esencial para la virulencia. Por lo tanto, este es un ejemplo de método de selección negativa.

• Saenz HL, Dehio C (octubre de 2005). "Mutagénesis con marcadores de firma: avances técnicos en un método de selección negativa para la identificación de genes de virulencia". Curr. Opin. Microbiol . 8 (5): 612– 9. doi : 10.1016/j.mib.2005.08.013 . PMID 16126452 .