Punto de sangre

La técnica de dot blot (o slot blot ) es un método de biología molecular utilizado para detectar proteínas. Representa una simplificación del método western blot , con la diferencia de que las proteínas a detectar no se separan previamente mediante electroforesis . En su lugar, la muestra se aplica directamente sobre una membrana en un solo punto y se realiza el procedimiento de transferencia.

Esta técnica ofrece un ahorro de tiempo significativo, ya que no requiere cromatografía ni electroforesis en gel , ni los complejos procedimientos de transferencia para el gel. Sin embargo, no proporciona información sobre el tamaño de la proteína objetivo. ^{[ 1 ]}

Realizar un dot blot es similar en concepto a realizar un western blot, con la ventaja de una mayor rapidez y un menor coste. ^{[ 2 ]} Los dot blots también se realizan para evaluar la capacidad de unión de un anticuerpo. ^{[ 3 ]}

Un protocolo general de dot blot consiste en depositar 1–2 microlitros de una muestra sobre una membrana de nitrocelulosa o PVDF y dejarla secar al aire. Las muestras pueden ser sobrenadantes de cultivo de tejidos, suero sanguíneo, extractos celulares u otras preparaciones. ^{[ 4 ]} Después de depositar las muestras de proteína sobre la membrana, esta se coloca en un recipiente de plástico y se incuba secuencialmente en tampón de bloqueo, soluciones de anticuerpos o tampón de lavado en agitador. Tras la unión del anticuerpo, la membrana se incuba con un sustrato quimioluminiscente y se obtiene la imagen.

Se ha utilizado un aparato de transferencia de puntos asistido por vacío para facilitar el proceso de enjuague e incubación, mediante la extracción de la solución por debajo de la membrana, la cual se encuentra entre varias capas de placas para asegurar un buen sellado entre los pocillos de muestra, retener la solución residual y generar fuerza de succión. Para la detección de la señal de quimioluminiscencia, es necesario desmontar el aparato y extraer la membrana, la cual debe envolverse en una película de plástico transparente.

• ELISpot
• Western blot