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TRIzol es una solución química ampliamente utilizada [ 1 ] en la extracción de ADN , ARN y proteínas de las células. La solución fue utilizada y publicada inicialmente por Piotr Chomczyński y Nicoletta Sacchi en 1987. [ 2 ]
TRIzol es el nombre comercial del tiocianato de guanidinio de la parte Ambion de Life Technologies , [ 3 ] y Tri-Reagent es el nombre comercial de MRC, [ 4 ] que fue fundada por Chomczynski.
Usos en la extracción
El nombre correcto del método es extracción con tiocianato de guanidinio-fenol-cloroformo . El uso de TRIzol puede dar como resultado rendimientos de ADN comparables a otros métodos de extracción, y conduce a un rendimiento de ARN >50% mayor. [ 5 ] [ 6 ] Un método alternativo para la extracción de ARN es la extracción con fenol y la precipitación con TCA/acetona. El cloroformo debe sustituirse por 1-bromo-3-cloropropano cuando se utilice el reactivo TRI de nueva generación.
El ADN y el ARN de los reactivos TRIzol y TRI también se pueden extraer utilizando el kit Direct-zol Miniprep de Zymo Research . [ 7 ] Este método elimina por completo el uso de cloroformo y 1-bromo-3-cloropropano, evitando los pasos de separación de fases y precipitación. [ 8 ]
TRIzol es sensible a la luz y suele almacenarse en un recipiente de vidrio oscuro cubierto con papel de aluminio. Se conserva a temperatura ambiente.
Al utilizarse, se asemeja a un jarabe para la tos, de color rosa brillante. El olor a fenol es extremadamente fuerte. TRIzol actúa manteniendo la integridad del ARN durante la homogeneización de los tejidos, al tiempo que desintegra y degrada las células y sus componentes.
Peligros
Se debe tener mucha precaución al usar TRIzol (debido al fenol y al cloroformo ).
TRIzol está etiquetado como tóxico agudo por vía oral, dérmica e inhalatoria, además de causar corrosión/irritación cutánea en la ficha de datos de seguridad del fabricante. [ 9 ]
La exposición al TRIzol puede suponer un grave riesgo para la salud. Puede provocar quemaduras químicas graves, cicatrices permanentes e insuficiencia renal.
Los experimentos deben realizarse bajo una campana extractora, con bata de laboratorio, guantes de nitrilo y delantal de plástico. [ 10 ] [ 11 ]
Los residuos de TRIzol nunca deben mezclarse con lejía ni ácidos: el tiocianato de guanidinio presente en el TRIzol reacciona formando gases altamente tóxicos.
Referencias
- ↑ "Aislamiento de ARN total: Trizol vs RNeasy" . www.bioastrum.com . Consultado el 18 de agosto de 2021 .
- ↑ Chomczynski, P; Sacchi, N (abril de 1987). "Método de un solo paso para el aislamiento de ARN mediante extracción con tiocianato de guanidinio ácido, fenol y cloroformo". Anal. Biochem . 162 (1): 156–9 . doi : 10.1016/0003-2697(87)90021-2 . PMID 2440339 .
- ↑ Tecnologías de la vida
- ↑ Centro de Investigación Molecular, Inc.
- ↑ "Aislamiento de ARN" (PDF) . Instalación de análisis celular . Archivado del original (PDF) el 18 de agosto de 2021. Consultado el 18 de agosto de 2021 .
- ↑ "Evaluación del método óptimo de extracción de ARN de la placa aterosclerótica carotídea humana. - Base de datos de investigación de muestras biológicas" . brd.nci.nih.gov . Consultado el 18 de agosto de 2021 .
- ↑ "Kits de micropreparación de ARN Direct-zol" .
- ↑ "Purificación de ácidos nucleicos" .
- ↑ "TRIZOl MDS" (PDF) .
- ↑ Hoja de datos de seguridad del material de Life Technologies. Archivada el 21/07/2008 en Wayback Machine.
- ↑ Hoja de datos de seguridad del material de MRC. Archivada el 28/12/2008 en Wayback Machine.
Enlaces externos
- Extracción de ARN mediante el protocolo Trizol en OpenWetWare.
- Biología molecular
- Métodos bioquímicos