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Articulo de referencia

Promotor de tacones

Vector tac para la expresión bacteriana de alto nivel El promotor Tac (abreviado como Ptac ), o vector tac , es un promotor de ADN producido sintéticamente , a partir de la comb...

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Vector tac para la expresión bacteriana de alto nivel

El promotor Tac (abreviado como Ptac ), o vector tac , es un promotor de ADN producido sintéticamente , a partir de la combinación de promotores de los operones trp y lac . [ 1 ] Se utiliza comúnmente para la producción de proteínas en Escherichia coli . [ 2 ]

Se construyeron dos promotores híbridos funcionales en Escherichia coli . Estos promotores híbridos, tacI y tacII, se derivaron de secuencias de los promotores trp y lac UV5. En el primer promotor híbrido (tacI), el ADN aguas arriba de la posición -20 con respecto al sitio de inicio de la transcripción se derivó del promotor trp. El ADN aguas abajo de la posición -20 se derivó del promotor lac UV5. En el segundo promotor híbrido (tacII), el ADN aguas arriba de la posición -11 en el sitio Hpa I dentro de la caja de Pribnow se derivó del promotor trp. El ADN aguas abajo de la posición -11 es un fragmento de ADN sintético de 46 pares de bases que especifica parte de la caja de Pribnow híbrida y el operador lac completo. También especifica una secuencia Shine-Dalgarno flanqueada por dos sitios de restricción únicos (secuencia Shine-Dalgarno portátil).

Los promotores tacI y tacII dirigen la transcripción aproximadamente 11 y 7 veces más eficientemente que el promotor parental lac UV5 desreprimido, y aproximadamente 3 y 2 veces más eficientemente que el promotor trp en ausencia del represor trp. Ambos promotores híbridos pueden ser reprimidos por el represor lac y ambos pueden ser desreprimidos con isopropil-beta-D-tiogalactósido. En consecuencia, estos promotores híbridos son útiles para la expresión controlada de genes foráneos a altos niveles en E. coli. A diferencia de los promotores trp y lac UV5, el promotor tacI no solo tiene una secuencia consenso -35, sino también una secuencia consenso de caja de Pribnow . Esto podría explicar la mayor eficiencia de este promotor híbrido con respecto a cualquiera de los promotores parentales. [ 1 ]

Acerca de

El promotor tac se utiliza para controlar y aumentar los niveles de expresión de un gen diana y se emplea en la sobreexpresión de proteínas recombinantes . El promotor tac recibe su nombre de los dos promotores que componen su secuencia: el ' trp ' y el ' lac'.' promotores.

Los promotores bacterianos constan de dos partes: la región '–35' y la región '–10' (la caja de Pribnow ). Estas dos regiones se unen al factor sigma de la ARN polimerasa , que luego inicia la transcripción del gen corriente abajo. El promotor tac consta de la región '–35' del promotor trp y la región '–10' del promotor lac (y difiere de un promotor trc relacionado por 1 pb [ 3 ] ). Por lo tanto, el promotor tac es inducible por IPTG (isopropil β- D -1-tiogalactopiranósido), a la vez que permite una mayor expresión génica máxima que los promotores lac o trp. Esto lo hace adecuado para la producción de proteínas recombinantes de alta eficiencia . [ 1 ] La fuerte represión de la expresión en el estado 'apagado' es importante ya que las proteínas extrañas pueden ser tóxicas para la célula huésped.

Aplicaciones

El promotor tac tiene diversas aplicaciones. El promotor/operador tac (conocido como PTAC ) es uno de los sistemas de expresión más utilizados. Ptac es un promotor híbrido fuerte compuesto por la región -35 del promotor trp y la región -10 del promotor/operador lacUV5. La expresión de PTAC está reprimida por la proteína lacI. El alelo lacI q es una mutación del promotor que aumenta la concentración intracelular del represor LacI, lo que resulta en una fuerte represión de PTAC. La adición del inductor IPTG inactiva el represor LacI. Por lo tanto, la cantidad de expresión de PTAC es proporcional a la concentración de IPTG añadida: concentraciones bajas de IPTG dan como resultado una expresión relativamente baja de PTAC y concentraciones altas de IPTG dan como resultado una expresión alta de PTAC. Al variar la concentración de IPTG, la cantidad de producto génico clonado aguas abajo de PTAC puede variar en varios órdenes de magnitud. [ 4 ] Por ejemplo, el sistema PTAC se utiliza para la expresión de proteínas de fusión dentro de la expresión PMAL-C2X. [ 5 ]

Referencias

  1. 1 2 3 de Boer, HA; Comstock, LJ; Vasser, M. (1983-01-01). "El promotor tac: un híbrido funcional derivado de los promotores trp y lac" . Actas de la Academia Nacional de Ciencias de los Estados Unidos de América . 80 (1): 21– 25. doi : 10.1073/pnas.80.1.21 . ISSN 0027-8424 . PMC 393301. PMID 6337371 .   
  2. ↑ Amann, Egon; Ochs, Birgit; Abel, Karl-Josef (1988-09-30). "Vectores promotores tac estrictamente regulados útiles para la expresión de proteínas fusionadas y no fusionadas en Escherichia coli ". Gene . 69 (2): 301– 315. doi : 10.1016/0378-1119(88)90440-4 . PMID 3069586 . 
  3. ↑ Brosius, J. (1985-03-25). "Espaciamiento de las regiones -10 y -35 en el promotor tac. Efecto sobre su actividad in vivo" . Journal of Biological Chemistry . 260 (6): 3539– 41. doi : 10.1016/S0021-9258(19)83655-4 . PMID 2579077 . 
  4. ↑ Stanley Maloy, Profesor, Decano de la Facultad de Ciencias, Director Asociado del Centro de Ciencias Microbianas, Doctor en Filosofía por la Universidad de California, Irvine.
  5. ↑ Biolabs, Nueva Inglaterra. "Expresión de la proteína de unión a maltosa | NEB" . www.neb.com . Consultado el 26 de febrero de 2016 .

Véase también