Hispanopedia WikiLos síntomas alérgicos se deben a una liberación sistémica inicial de histamina por parte de basófilos y mastocitos activados , lo que puede provocar un shock con edema laríngeo , obstrucción de las vías respiratorias inferiores e hipotensión . Por ello, los basófilos, junto con los mastocitos, se consideran células clave en las enfermedades alérgicas.
Proceso de activación
La inmunoglobulina E ( IgE ) es una clase de anticuerpo (o "isotipo" de inmunoglobulina) que solo se ha encontrado en mamíferos. Desempeña un papel importante en la alergia y está especialmente asociada con la hipersensibilidad de tipo 1. Existen receptores (FcεR) para la región constante de la IgE, la región Fc , en varios tipos de células, incluyendo mastocitos y basófilos. Los basófilos contienen numerosos gránulos en su interior, que están llenos de diversas sustancias activas que desencadenan una respuesta alérgica tras la degranulación. Las células se activan y comienzan la degranulación cuando el anticuerpo IgE, unido a un alérgeno que puede unirse a la región variable específica de la IgE, la región Fab , se une al receptor Fc.
Método de prueba de alergia in vitro
En la mayoría de los casos, se utiliza una prueba cutánea positiva para identificar alergias, pero la activación de los granulocitos basófilos con anti-IgE y la expresión del antígeno CD63 en la superficie celular (membrana plasmática) permiten identificar el alérgeno responsable de la reacción de hipersensibilidad sin realizar la prueba de punción cutánea habitual . Solo se necesita una pequeña cantidad de sangre para este experimento, lo que facilita su uso, ya que se puede realizar en paralelo a un análisis de sangre normal. Se puede utilizar para diferentes alergias (p. ej., veneno de abeja , fármacos , medios de contraste [ 1 ] ).
Desgranulación
Las células desgranuladas exponen moléculas de CD63 [ 2 ] en su membrana celular externa; por lo tanto, los gránulos , que contienen moléculas de CD63 en su superficie interna, se fusionan con la membrana celular. La superficie celular interna de los gránulos se convierte en la superficie celular externa del basófilo/mastocito durante el proceso de desgranulación.
Etiquetado y clasificación
Dado que la citometría de flujo es una herramienta valiosa para analizar grandes cantidades de células e identificar poblaciones celulares, incluso a bajas concentraciones, se puede determinar el porcentaje de basófilos activados tras la estimulación in vitro con alérgenos y que expresan el marcador CD63. El marcador CD63 es un antígeno marcado con isotiocianato de fluoresceína que se une a la proteína CD63 y se utiliza para clasificar las células mediante FACS (clasificación celular activada por fluorescencia). Este antígeno marcado con FITC emite luz a una longitud de onda de 530 nm. Como la intensidad de la fluorescencia emitida es proporcional a los sitios de unión de cada célula, la intensidad aumentará en función del número de anticuerpos conjugados con FITC unidos a las células que expresan CD63.
Procedimiento
Se prepara un tubo de ensayo con tampón de estimulación de basófilos (BSB) que contiene interleucina 3 y un alérgeno que se va a analizar. Se añade la muestra de sangre y se incuba el tubo a 37 °C durante varios minutos para asegurar que los alérgenos se unan a la IgE. Al añadir EDTA al tubo de ensayo, se detiene inmediatamente el proceso de desgranulación. Tras la desgranulación, se añade un marcador CD63 (anticuerpos marcados) al tubo de ensayo. Tras varios minutos a temperatura ambiente, el marcador tiene tiempo de unirse a las proteínas CD63 de la membrana celular del basófilo. Se realiza un paso de lisis para eliminar los glóbulos rojos. Dado que superan con creces en número a los leucocitos, es necesario eliminarlos para realizar un análisis FACS de los basófilos.
Véase también
Referencias
- ↑ Böhm I et al. Estudio piloto sobre la activación de basófilos inducida por medio de contraste . Fundam Clin Pharmacol 2011;25:267 - 276
- ↑ Janeway CA, Jr. ; et al. (2001). Inmunobiología (5.ª ed.). Garland Publishing. ISBN 0-8153-3642-X( Texto completo electrónico a través de NCBI Bookshelf )
Enlaces externos
- Alergia molecular clínica (CMA)
- Biología celular
- Granulocitos
- Células humanas