Centrifugación por densidad flotante

La centrifugación de densidad flotante (también centrifugación isopícnica o centrifugación en gradiente de densidad de equilibrio ) utiliza el concepto de flotabilidad para separar las moléculas en solución por sus diferencias de densidad.

Implementación

Históricamente, se solía utilizar una solución de cloruro de cesio (CsCl), pero los gradientes de densidad más utilizados son la sacarosa o el Percoll . Esta aplicación requiere una solución con alta densidad y, sin embargo, una viscosidad relativamente baja, y el CsCl es adecuado para ello debido a su alta solubilidad en agua, alta densidad debido a la gran masa de Cs, así como baja viscosidad y alta estabilidad de las soluciones de CsCl. ^[1]

La muestra se coloca sobre la solución y luego se hace girar el tubo a una velocidad muy alta durante un tiempo prolongado, que a veces dura días. Las moléculas de CsCl se compactan hacia el fondo, por lo que se forma un gradiente continuo de capas de diferentes densidades (y concentraciones de CsCl). Dado que la solución original tenía aproximadamente la misma densidad, llegan a un nivel en el que su densidad y la densidad del CsCl son iguales, y forman una banda nítida y distintiva.

Separación de isótopos

Este método separa las moléculas de forma muy nítida, y es tan preciso que incluso puede separar diferentes isótopos moleculares entre sí. ^[2] Se ha utilizado en el experimento de Meselson-Stahl .

Separación del ADN

La densidad de flotabilidad de la mayoría del ADN es de 1,7 g/cm ³^[3], que es igual a la densidad de una solución de CsCl 6 M. ^{[ cita requerida ]} La densidad de flotabilidad del ADN cambia con su contenido de GC . El término " ADN satélite " se refiere a pequeñas bandas de secuencias de ADN repetitivas con una composición de bases distinta que flotan por encima (ricas en A+T) o por debajo (ricas en G+C) del ADN componente principal.

Véase también

Referencias

^ Burt, Richard O. (4 de diciembre de 2000). "Cesio y compuestos de cesio". Enciclopedia Kirk-Othmer de tecnología química . doi :10.1002/0471238961.0305190902211820.a01.
^ Dumont, Marc G.; Murrell, J. Colin (junio de 2005). "Sondeo de isótopos estables: vinculación de la identidad microbiana con la función". Nature Reviews Microbiology . 3 (6): 499–504. doi :10.1038/nrmicro1162. ISSN 1740-1534. PMID 15886694. S2CID 24051877.
^ Arrighi, Frances E.; Mandel, Manley; Bergendahl, Janet; Hsu, TC (junio de 1970). "Densidades flotantes del ADN de los mamíferos". Genética bioquímica . 4 (3): 367–376. doi :10.1007/BF00485753. PMID 4991030.

Lectura adicional

Schildkraut, Carl L.; Marmur, Julius; Doty, Paul (1962). "Determinación de la composición de bases del ácido desoxirribonucleico a partir de su densidad de flotación en CsCl". Revista de Biología Molecular . 4 (6): 430–443. doi :10.1016/S0022-2836(62)80100-4. ISSN 0022-2836. PMID 14498379.
James Greene (25 de junio de 1998). Principios y metodologías del ADN recombinante. CRC Press. pp. 278–. ISBN 978-0-8247-9989-2.

[1] Burt, Richard O. (4 de diciembre de 2000). "Cesio y compuestos de cesio". Enciclopedia Kirk-Othmer de tecnología química . doi :10.1002/0471238961.0305190902211820.a01.

[2] Dumont, Marc G.; Murrell, J. Colin (junio de 2005). "Sondeo de isótopos estables: vinculación de la identidad microbiana con la función". Nature Reviews Microbiology . 3 (6): 499–504. doi :10.1038/nrmicro1162. ISSN 1740-1534. PMID 15886694. S2CID 24051877.

[3] Arrighi, Frances E.; Mandel, Manley; Bergendahl, Janet; Hsu, TC (junio de 1970). "Densidades flotantes del ADN de los mamíferos". Genética bioquímica . 4 (3): 367–376. doi :10.1007/BF00485753. PMID 4991030.