Detección de organismos genéticamente modificados

La PCR cuantitativa (qPCR) se utiliza para medir la cantidad de un producto de PCR (preferiblemente en tiempo real, qRT-PCR). ^{[ 2 ]} Es el método de elección para medir cuantitativamente las cantidades de ADN transgénico en una muestra de alimento o pienso. La qPCR se utiliza comúnmente para determinar si una secuencia de ADN está presente en una muestra y el número de copias de la misma. El método con el mayor nivel de precisión actualmente es la PCR cuantitativa en tiempo real. Los métodos de qRT-PCR utilizan colorantes fluorescentes, como Sybr Green, o sondas de ADN que contienen fluoróforos, como TaqMan , para medir la cantidad de producto amplificado en tiempo real. Si la secuencia genética objetivo es única para un determinado OMG, una prueba de PCR positiva demuestra que el OMG está presente en la muestra.

La presencia de un OMG en una muestra se puede determinar mediante PCR cuantitativa (qPCR) y PCR múltiple . La PCR múltiple utiliza múltiples conjuntos de cebadores únicos en una sola reacción para producir amplicones de diferentes tamaños específicos para distintas secuencias de ADN, es decir, diferentes transgenes. Al analizar varios genes simultáneamente, se puede obtener información adicional en una sola prueba, información que de otro modo requeriría varias veces más reactivos y más tiempo. Las temperaturas de hibridación para cada conjunto de cebadores deben optimizarse para que funcionen correctamente en una sola reacción, y los tamaños de los amplicones , es decir, su longitud en pares de bases , deben ser lo suficientemente diferentes como para formar bandas distintas al visualizarlas mediante electroforesis en gel .

La detección específica de eventos busca la presencia de una secuencia de ADN única de un OMG determinado, generalmente la unión entre el transgén y el ADN original del organismo. Este método es ideal para identificar con precisión un OMG, aunque otros OMG muy similares pasarán completamente desapercibidos. La detección específica de eventos se basa en la PCR.

Los métodos de detección específicos para cada construcción pueden basarse en ADN o en proteínas . La detección basada en ADN busca una parte del ADN extraño insertado en un OMG. Por razones técnicas, ciertas secuencias de ADN son compartidas por varios OMG. Los métodos basados ​​en proteínas detectan el producto del transgén, por ejemplo, la toxina Bt . Dado que diferentes OMG pueden producir la misma proteína, la detección específica para cada construcción permite analizar una muestra para detectar varios OMG en un solo paso, pero no permite determinar con precisión cuáles de los OMG similares están presentes. Especialmente en Estados Unidos, la detección basada en proteínas se utiliza para el enfoque específico para cada construcción.

Mejorar la detección de OMG mediante PCR es otro objetivo del programa de investigación europeo Co-Extra. Actualmente se están realizando investigaciones para desarrollar métodos de PCR multiplex que permitan detectar simultáneamente muchas líneas transgénicas diferentes. Otro reto importante es la creciente prevalencia de cultivos transgénicos con rasgos apilados . Esto se refiere a cultivares transgénicos derivados de cruces entre líneas parentales transgénicas, que combinan los rasgos transgénicos de ambos progenitores. Una variedad de maíz transgénico que actualmente espera una decisión de la Comisión Europea, MON863 x MON810 x NK603 , posee tres rasgos apilados: es resistente a un herbicida y a dos tipos diferentes de plagas de insectos. Algunos métodos de análisis combinados podrían arrojar resultados que triplicarían el contenido real de OMG en una muestra que contenga este OMG.

Casi todas las plantas transgénicas contienen algunos componentes básicos comunes que facilitan la detección de organismos genéticamente modificados (OGM) desconocidos. Si bien detectar un gen nuevo en un OGM puede ser como buscar una aguja en un pajar, el hecho de que las agujas suelan ser similares lo simplifica considerablemente. Para activar la expresión génica, los científicos acoplan el gen que desean añadir con lo que se conoce como promotor de transcripción . El promotor 35S, de alto rendimiento, es una característica común en muchos OGM. Además, la señal de parada para la transcripción génica en la mayoría de los OGM suele ser la misma: el terminador NOS . Actualmente, los investigadores recopilan un conjunto de secuencias genéticas características de los OGM. Una vez seleccionados los elementos genéticos característicos de los OGM, se desarrollan métodos y herramientas para detectarlos en muestras de prueba. Entre los enfoques que se están considerando se incluyen los microarrays y el perfilado de PCR de anclaje.

La detección por fluorescencia en el infrarrojo cercano (NIR) es un método que permite identificar los compuestos químicos presentes en una muestra a partir de sus propiedades físicas. Al irradiar una muestra con luz infrarroja cercana , los enlaces químicos vibran y liberan la energía lumínica a una longitud de onda característica de una molécula o enlace químico específico. Aún se desconoce si las diferencias entre los organismos genéticamente modificados (OGM) y las plantas convencionales son lo suficientemente significativas como para detectarlas mediante imágenes NIR. Si bien esta técnica requiere maquinaria avanzada y herramientas de procesamiento de datos, un enfoque no químico podría ofrecer ventajas como menores costos y mayor velocidad y movilidad.

Los cantones de Suiza realizan pruebas para evaluar la presencia de organismos genéticamente modificados (OGM) en los alimentos. En 2008, el 3 % de las muestras analizadas contenían cantidades detectables de OGM. ^{[ 3 ]} En 2012, el 12 % de las muestras analizadas contenían cantidades detectables de OGM (incluido el 2,4 % de OGM prohibidos en Suiza). ^{[ 3 ]} Excepto una, todas las muestras analizadas contenían menos del 0,9 % de OGM; que es el umbral que exige el etiquetado que indica la presencia de OGM. ^{[ 3 ]}