Mancha de sangre seca

La prueba de muestra de sangre seca (DBS, por sus siglas en inglés) es una forma de muestreo biológico en la que las muestras de sangre se recogen y secan sobre papel de filtro . Las muestras secas se pueden enviar fácilmente a un laboratorio de análisis y analizar mediante diversos métodos, como la amplificación de ADN o la cromatografía líquida de alta resolución .

Ivar Bang describió por primera vez el DBS como un método de muestreo inusual en 1913. ^{[ 1 ]} El concepto de que la sangre capilar, obtenida mediante punción en el talón o el dedo y transferida a papel de filtro, podría utilizarse para detectar enfermedades metabólicas en grandes poblaciones de neonatos fue introducido en Escocia por Robert Guthrie en 1963. El cribado neonatal de fenilcetonuria se generalizó a nivel nacional en 1969-70. Desde entonces, se han recogido muestras de tarjetas Guthrie de forma rutinaria de lactantes en más de 20 países para detectar fenilcetonuria y, más recientemente, hipotiroidismo congénito , trastornos de células falciformes e infección por VIH. Las limitaciones de sensibilidad y especificidad al analizar volúmenes tan pequeños de sangre restringieron el uso de muestras de sangre seca durante muchos años. Sin embargo, avances recientes como la producción de anticuerpos monoclonales , la expresión de proteínas sintéticas y la introducción de la reacción en cadena de la polimerasa han superado muchos de estos problemas. ^{[ 2 ]}

Este tipo de análisis de sangre ya está disponible para uso doméstico en Estados Unidos. Entre los análisis disponibles se incluyen los de vitamina D, estrógeno, testosterona, cortisol, TSH y lípidos. Nueva York es el único estado que prohíbe las pruebas caseras con muestras de sangre.

Para el año 2001, se habían medido más de 175 analitos utilizando DBS, que abarcaban desde acilcarnitinas y proteína C reactiva hasta ciclosporina A, citocinas, virus de la hepatitis B, glucosa y anticuerpos para más de 30 virus y microorganismos. También se midieron otros analitos, como gentamicina , lipoproteínas, prolactina , selenio, oligoelementos, vitamina A y protoporfirina de zinc. ^{[ 3 ] [ 4 ]}

En el siglo XX, ya se había documentado el uso de sangre y suero recolectados y secados en papel de filtro para pruebas serológicas de sífilis . Se describieron tanto la recolección de muestras en el campo como en el hogar. ^{[ 3 ]}

El primer informe sobre sangre absorbida en papel de filtro para mediciones enzimáticas se publicó en 1953. ^{[ 3 ] [ 5 ]}

En 1962, Berry exploró el uso de muestras de orina en papel de filtro para programas de detección poblacional. ^{[ 3 ] [ 6 ]}

En 1980, se introdujo una prueba inmunoquímica para la detección del cáncer colorrectal mediante frotis de sangre oculta en heces sobre papel de filtro especialmente tratado. ^{[ 3 ] [ 7 ]}

En 1987, McCabe informó por primera vez sobre la extracción exitosa de ADN de sangre recolectada en papel secante y secada. ^{[ 3 ] [ 8 ]}

Estados Unidos puede servir como uno de los mejores ejemplos de uso generalizado de DBS. Allí, DBS forma parte de un esfuerzo coordinado a nivel nacional (controlado por los Centros para el Control y la Prevención de Enfermedades de EE. UU.) para el cribado neonatal. Este programa, denominado Programa de Garantía de Calidad del Cribado Neonatal (NSQAP, por sus siglas en inglés), garantiza que los recién nacidos se sometan rutinariamente a pruebas de cribado para detectar aquellos con enfermedades que requieren mayor atención médica. El NSQAP se basa en el muestreo de muestras de sangre seca, donde la sangre se recoge del talón del recién nacido. ^{[ 9 ]}

Las muestras de sangre seca se obtienen aplicando unas gotas de sangre capilar , extraída con una lanceta del dedo, el talón o el pie, sobre un papel de filtro absorbente especialmente fabricado. Se deja que la sangre sature completamente el papel y se deja secar al aire durante varias horas. ^{[ 10 ]} Las muestras se almacenan en bolsas de plástico de baja permeabilidad a los gases con desecante añadido para reducir la humedad y pueden conservarse a temperatura ambiente, incluso en climas tropicales.

Una vez en el laboratorio, los técnicos separan un pequeño disco de papel saturado de la hoja utilizando una perforadora automática o manual, y lo depositan en una placa de microtitulación de fondo plano. La sangre se eluye en solución salina tamponada con fosfato que contiene 0,05 % de Tween 80 y 0,005 % de azida sódica , durante toda la noche a 4  °C. La placa resultante, que contiene los eluidos, constituye la "muestra maestra" a partir de la cual se pueden realizar diluciones para análisis posteriores. ^{[ 2 ]}

Como alternativa a la perforación de un disco de papel, las soluciones de automatización recientes extraen la muestra haciendo pasar un eluyente a través del filtro sin perforarlo. ^{[ 11 ] [ 12 ]} La empresa suiza CAMAG desarrolló una automatización que incluye la aplicación de un estándar interno antes de la extracción. ^{[ 13 ]}

La tecnología tiene como objetivo mejorar los servicios de diagnóstico para bebés y pacientes infectados por el VIH, iniciar el tratamiento y suprimir la replicación del virus. ^{[ 14 ]} Es ideal en entornos con recursos limitados debido a la mayor vida útil de las muestras, la menor necesidad de refrigeración y la naturaleza menos invasiva de la prueba en comparación con otros métodos. A diferencia de la prueba ELISA para anticuerpos contra el VIH en la sangre, que puede transmitirse a los bebés durante el embarazo independientemente del virus en sí, la prueba de muestra de sangre seca (DBS) puede utilizarse para detectar el material genético del virus, evitando así la probabilidad de un resultado falso positivo . Las muestras DBS también presentan un menor riesgo biológico para quienes las manipulan y son más fáciles de transportar o almacenar que las muestras de sangre líquida. ^{[ 15 ]} Los resultados de las muestras DBS se correlacionan con las pruebas de plasma tradicionales, la muestra estándar. Esta tecnología está disponible en países con alta prevalencia de VIH, gracias a la colaboración con diferentes organizaciones de salud y gobiernos nacionales. ^{[ 14 ]}

La estabilidad del ADN, ARN o proteínas se debe a que el material biológico se adhiere a la matriz del papel de filtro y el proceso de secado elimina el agua, un factor importante para la acción de proteasas o nucleasas. La unión del material biológico también retiene diversos inhibidores que pueden interferir con distintos métodos de amplificación de ácidos nucleicos.

La DBS posee características importantes que la hacen idónea para aplicaciones actuales y futuras. Presenta un riesgo mínimo de contaminación bacteriana y/o hemólisis. Es un método de recolección sencillo, no invasivo y económico. Las muestras de DBS pueden almacenarse durante períodos prolongados prácticamente sin deterioro de los analitos y requieren menos sangre en comparación con la venopunción convencional. Es el método ideal para la toma de muestras en lugares remotos o en el hogar, especialmente útil en zonas rurales. ^{[ 16 ]}

Sin embargo, existen algunas preocupaciones asociadas con el muestreo biológico de DBS. Estas incluyen desafíos relacionados con el volumen de la muestra, la recuperación del analito, el efecto del hematocrito, la homogeneidad de la muestra y las características del papel de filtro utilizado. ^{[ 3 ]}

Esta tecnología es similar al muestreo de sangre seca en gota, pero en lugar de recolectar sangre entera en una membrana, separa los glóbulos rojos del plasma . Una gota de plasma seco (DPS, por sus siglas en inglés) suele ser una gota de sangre capilar en una tarjeta de separación de plasma. La primera membrana filtra todos los glóbulos rojos, mientras que la segunda absorbe el plasma libre de células. Este método es ideal para el procesamiento y almacenamiento de plasma. ^{[ 17 ]}

• reacción en cadena de la polimerasa
• Cromatografía líquida de alto rendimiento