Llamada genética

En el campo de la genómica , GeneCalling es una técnica de perfilado transcripcional de ARNm de plataforma abierta . ^{[ 1 ]} El protocolo GeneCalling mide los niveles de ADNc , que se correlacionan con los niveles de expresión génica de transcritos específicos . En esta tecnología se examinan y comparan las diferencias entre la expresión génica en tejidos sanos y tejidos enfermos o que responden a fármacos. ^{[ 2 ]} La técnica se ha aplicado al estudio de tejidos humanos ^{[ 3 ]} y tejidos vegetales. ^{[ 4 ]}

En el protocolo GeneCalling, los ARNm se aíslan primero de una muestra determinada y se procesan en fragmentos para su análisis. Esto generalmente implica la síntesis y subdivisión de ADNc de doble cadena a partir de ARN poliA . Luego se pueden usar conjuntos distintos de enzimas de restricción para digerir conjuntos de los ADNc divididos y los fragmentos resultantes se ligan a adaptadores marcados para ser amplificados por PCR . Los productos de PCR luego se purifican y se someten a electroforesis en gel en una plataforma montada que emplea excitación láser estacionaria y un sistema de imágenes de dispositivo de carga acoplada multicolor . ^{[ 5 ]} Una etiqueta fluorescente en el extremo 5' de uno de los cebadores de PCR permite la visualización de los fragmentos de PCR, y los ADNc se someten a varias digestiones de restricción aisladas e idénticas para generar un perfil fusionado basado en la altura del pico y la varianza. ^{[ 6 ]} Los perfiles de digestión fusionados de las preparaciones de ADNc se comparan luego para localizar fragmentos expresados ​​diferencialmente (como entre tejido normal y tejido enfermo o que responde a fármacos); Estos perfiles se comparan mediante diversas bases de datos disponibles en internet, como GeneScape. ^{[ 7 ]}