Hispanopedia WikiEl promotor lacUV5 es un promotor mutado del operón lac de Escherichia coli que se utiliza en biología molecular para impulsar la expresión génica en un plásmido . lacUV5 es muy similar al promotor lac clásico , con solo dos mutaciones de pares de bases en la región del hexámero -10 , en comparación con el promotor lac . [ 1 ] LacUV5 es uno de los promotores más utilizados en biología molecular porque no requiere activadores adicionales e impulsa altos niveles de expresión génica. [ 2 ]
La secuencia del promotor lacUV5 se ajusta más estrechamente a la secuencia consenso reconocida por los factores sigma bacterianos que el promotor lac tradicional. [ 3 ] : 4b Debido a esto, lacUV5 recluta la ARN polimerasa de manera más efectiva, lo que conduce a una mayor transcripción de los genes diana. Además, a diferencia del promotor lac , lacUV5 funciona independientemente de las proteínas activadoras u otros elementos reguladores cis (aparte de las regiones promotoras -10 y -35). [ 2 ] Si bien no se requieren activadores, la expresión del promotor lacUV5 puede ser regulada por el represor LacI y puede ser inducida con IPTG , que es un inductor efectivo de la expresión de proteínas cuando se usa en el rango de concentración de 100 μM a 1,5 mM. Debido a este control, el promotor lacUV5 se encuentra comúnmente en plásmidos de expresión y se usa cuando se desean niveles altos pero controlables de un producto.
La mutación lacUV5 se identificó por primera vez en 1970 en un estudio de mutantes del promotor lac que producían mayores rendimientos. Algunos de ellos, incluido UV5, han perdido la represión catabólica en el sitio CAP. [ 4 ] El desarrollo de vectores de clonación se conoce desde 1982, cuando un fago portador de UV5 conocido como "λ h80 lac UV5 cI857" tiene su genoma empalmado con la enzima de restricción HaeIII para producir plásmidos que contienen el fragmento con UV5. [ 5 ]
Secuencia
El operón lacUV5 moderno se observa en la cepa BL21(DE3), que porta tanto un operón lac con el promotor estándar como un operón lacUV5 dividido por el profago DE3 (y como resultado, dirige la ARN polimerasa T7 ). [ 1 ] Las dos mutaciones importantes están subrayadas.
lacUV5 TCACTCATTAGGCACCCCAGGC TTTACA CTTTATGCTTCCGGCTCG TAT AA T GTGTGGAATTGTGAGCGGATAACAATTTCACACAGGAAACAGCT [ 6 ] LacZ TCACTCATTAGGCACCCCAGGC TTTACA CTTTATGCTTCCGGCTCG TAT GT T GTGTGAAATTGTGAGCGGATAACAATTTCACACAGGAAACAGCT [ 7 ] posición ^-35 ^-10 ^+1
Referencias
- 1 2 Studier, FW; Moffatt, BA (5 de mayo de 1986). "Uso de la ARN polimerasa del bacteriófago T7 para dirigir la expresión selectiva de alto nivel de genes clonados". Journal of Molecular Biology . 189 (1): 113– 30. doi : 10.1016/0022-2836(86)90385-2 . PMID 3537305 .
- 1 2 Noel RJ, Reznikoff WS (10 de marzo de 2000). "Estudios estructurales de las interacciones lacUV5-ARN polimerasa in vitro" . Journal of Biological Chemistry . 275 (11): 7708– 7712. doi : 10.1074/jbc.275.11.7708 . PMID 10713082 .
- ↑ Pribnow, D (1975). "Promotores tempranos del bacteriófago T7: secuencias de nucleótidos de dos sitios de unión de la ARN polimerasa". Journal of Molecular Biology . 99 (3): 419– 443. doi : 10.1016/S0022-2836(75)80136-7 . PMID 765476 .
- ↑ Silverstone, AE; Arditti, RR; Magasanik, B (julio de 1970). "Revertantes insensibles a catabolitos de mutantes del promotor lac" . Actas de la Academia Nacional de Ciencias de los Estados Unidos de América . 66 (3): 773– 9. Bibcode : 1970PNAS...66..773S . doi : 10.1073/pnas.66.3.773 . PMC 283117. PMID 4913210 .
- ↑ Fuller, F (1982). "Una familia de vectores de clonación que contienen el promotor lacUV5". Gene . 19 (1): 43– 54. doi : 10.1016/0378-1119(82)90187-1 . PMID 6292048 .
- ↑ "Cromosoma completo de la cepa BLR(DE3) de Escherichia coli" . GenBank . 13 de abril de 2017. Consultado el 21 de abril de 2019 .
- ↑ "Cromosoma de la cepa BLR(DE3) de Escherichia coli, LacZ" . GenBank . Consultado el 21 de abril de 2019 .
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