Ley de Vida

LifeAct es un péptido recombinante de 17 aminoácidos que tiñe las estructuras de actina filamentosa (actina F) de células eucariotas vivas o fijas. ^{[ 1 ]} Existen varios tipos y combinaciones de LifeAct que se pueden utilizar según el tipo de célula, el protocolo y el propósito del análisis.

La secuencia de aminoácidos de Lifeact 17 es MGVADLIKKFESISKEE. ^{[ 1 ]}

• Plásmido LifeAct
• ARNm de LifeAct
• Adenovirus LifeAct
• Lentivirus LifeAct
• Proteína LifeAct

LifeAct-TagGFP2, la variante fluorescente más utilizada en comparación con otras construcciones de LifeAct, está compuesta por los primeros 17 aminoácidos de Abp140 de Saccharomyces cerevisiae , una proteína de unión a la actina. Abp140 está altamente conservada entre Saccharomyces cerevisiae y otros organismos estrechamente relacionados. ^{[ 2 ]} El fragmento de 17 aminoácidos de Abp140 se fusionó genéticamente con GFP y fluoresce en verde cuando se une a las estructuras de actina F de células vivas y fijas, lo que permite visualizar la mecánica celular bajo microscopios. Experimentos previos que involucraban el análisis de la mecánica celular habían dependido de faloidina marcada fluorescentemente y proteínas de fusión de actina GFP obtenidas de utrofina en Xenopus laevis y ABP120 en Dictyostelium discoideum . ^{[ 3 ] [ 4 ]} Sin embargo, debido a su gran tamaño proteico, los marcadores como la faloidina y las proteínas de fusión GFP se limitan a las células que pueden ser transfectadas y tienden a competir con su proteína ortóloga . Estos marcadores de localización afectan las propiedades mecánicas celulares y las estructuras de actina F, lo que los hace poco fiables. ^{[ 5 ]} Una alternativa a estos marcadores es Life Act-TagGFP2, que es una proteína mucho más pequeña y no afecta la mecánica celular. Las células sintetizan LifeAct-TagGFP2 en un corto período de tiempo, lo que lo hace adecuado como un marcador in vivo rentable . ^{[ 1 ]}

Los péptidos LifeAct se han utilizado como marcador universal para la visualización de la actina F en la investigación biomédica. Un experimento realizado por Sawant et al. utilizó LifeAct GFP para visualizar la migración de células de borde de control en los ovarios de moscas Drosophila , con el fin de determinar cómo se mueven las células en términos de pequeños y grandes colectivos durante el desarrollo y el cáncer. ^{[ 6 ]} LifeAct marca la actina F en las células de borde y las células foliculares adyacentes , lo que permitió el examen detallado de las membranas y protrusiones de las células de borde. Los estudios sobre la degradación del citoesqueleto de actina debido al envejecimiento se basaron en LifeAct para el análisis de la organización del citoesqueleto en función de la edad. Las líneas transgénicas que expresaban LifeAct en varios tejidos de C. elegans se utilizaron principalmente para la obtención de imágenes. ^{[ 7 ]}