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Articulo de referencia

prueba de oxidasa

La prueba de la oxidasa se utiliza para determinar si un organismo posee la enzima citocromo c oxidasa . Esta prueba se emplea para diferenciar las especies de Neisseria , Morax...

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La prueba de la oxidasa se utiliza para determinar si un organismo posee la enzima citocromo c oxidasa . Esta prueba se emplea para diferenciar las especies de Neisseria , Moraxella , Campylobacter y Pasteurella (oxidasa positiva). También se utiliza para diferenciar las pseudomonas de especies relacionadas. [ 1 ]

Clasificación

Las cepas pueden ser oxidasa-positivas (OX+) o oxidasa-negativas (OX-).

OX+

OX+ normalmente significa que la bacteria contiene citocromo c oxidasa (también conocido como Complejo IV) y, por lo tanto, puede utilizar oxígeno para la producción de energía mediante la conversión de O 2 en H 2 O 2 o H 2 O con una cadena de transferencia de electrones .

Las Pseudomonadaceae son típicamente OX+. [ 1 ]

Los diplococos Gram negativos Neisseria y Moraxella son oxidasa positivos. [ 2 ]

Muchas bacterias Gram negativas con forma de bacilo espiral también son oxidasa positivas, entre las que se incluyen Helicobacter pylori , Vibrio cholerae y Campylobacter jejuni .

Oxidasa variable

Legionella pneumophila puede ser oxidasa-positiva. [ 3 ]

OX−

Normalmente, OX− significa que la bacteria no contiene citocromo c oxidasa y, por lo tanto, o bien no puede utilizar el oxígeno para la producción de energía mediante una cadena de transferencia de electrones , o bien emplea un citocromo diferente para transferir electrones al oxígeno.

Las Enterobacteriaceae son típicamente OX−. [ 4 ]

Mecanismo

TMPD
DMPD

La prueba utiliza discos impregnados con reactivos como N,N,N′,N′ -tetrametil- p -fenilendiamina , TMPD (o N,N -dimetil- p -fenilendiamina , DMPD, que es otro indicador redox ). El reactivo es de color azul oscuro a granate cuando se oxida y es incoloro cuando se reduce. Las bacterias oxidasa-positivas poseen citocromo oxidasa o indofenol oxidasa (una hemoproteína que contiene hierro). [ 5 ] Ambas catalizan el transporte de electrones desde compuestos donadores ( NADH ) a aceptores de electrones (generalmente oxígeno). El reactivo de prueba TMPD actúa como un donador de electrones artificial para la enzima oxidasa. El reactivo oxidado forma el compuesto coloreado azul de indofenol . El sistema del citocromo generalmente solo está presente en organismos aerobios que son capaces de usar oxígeno como aceptor terminal de electrones. El producto final de este metabolismo es agua o peróxido de hidrógeno (descompuesto por la catalasa ). [ 1 ]

Procedimientos

  1. Humedezca cada disco con aproximadamente cuatro asas de siembra de agua desionizada.
  2. Utilice un asa de siembra para transferir asépticamente una gran cantidad de bacterias puras al disco.
  3. Observe el disco durante un máximo de tres minutos. Si la zona de inoculación cambia de color azul oscuro a granate o casi negro, el resultado es positivo. Si no se produce ningún cambio de color en tres minutos, el resultado es negativo.

Como alternativa, se pueden preparar bacterias vivas cultivadas en placas de agar tripticasa de soja mediante una técnica estéril con siembra en estría simple. Las placas inoculadas se incuban a 37  °C durante 24-48 horas para el desarrollo de colonias. Se deben utilizar preparaciones bacterianas frescas. Una vez que las colonias hayan crecido en el medio, se añaden 2-3 gotas del reactivo DMPD a la superficie de cada microorganismo que se vaya a analizar.

  • Un resultado positivo (OX+) se manifestará con un cambio de color de violeta a púrpura en un plazo de 10 a 30 segundos.
  • Un resultado negativo (OX-) se manifestará como una coloración rosa pálida o ausencia de coloración.

Referencias

  1. 1 2 3 MacFaddin JF, editor. Pruebas bioquímicas para la identificación de bacterias médicas. 3.ª ed. Filadelfia: Lippincott Williams and Wilkins; 2000. págs. 363-7
  2. ↑ ST, Cowan; Steel, KJ (1993). Manual de Cowan y Steel para la identificación de bacterias médicas (3.ª  ed.). Cambridge: Cambridge University Press. ISBN 9780511527104.
  3. ↑ "UK SMI" (PDF) .
  4. ↑ Farmer JJ, Fanning GR, Huntley-Carter GP, et al. (mayo de 1981). "Kluyvera, un nuevo género (redefinido) en la familia Enterobacteriaceae: identificación de Kluyvera ascorbata sp. nov. y Kluyvera cryocrescens sp. nov. en muestras clínicas" . J. Clin. Microbiol . 13 (5): 919–33 . doi : 10.1128/jcm.13.5.919-933.1981 . PMC 273917. PMID 7240403 .   
  5. ↑ Isenberg HD, editor. Manual de procedimientos de microbiología clínica. Sociedad Americana de Microbiología; 2004. pág. 3.3.2-3.3.2.13.
  • Sociedad Americana de Microbiología, Protocolo de prueba de oxidasa. 2013. ASM MicrobeLibrary, 1–9.
  • Cheng WJ, Lin CW, Wu TG, Su CS, Hsieh M S. 2013. Calibración de tiras reactivas basadas en glucosa oxidasa para la medición de sangre capilar con muestras de sangre venosa saturada de oxígeno. Clinica Chimica Acta. 415, 152–157.
  • Corchia L, Hubault R, Quinquenel B, N'Guyen. 2015. Conjuntivitis de rápida evolución debida a Pasteurella multocida, que se produce tras la inoculación directa con gotitas de origen animal en un huésped inmunocomprometido. BMC Ophthalmology 15.1, 21.
  • Floch C, Alarcon-Gutiérrez E, Criquet S. 2007. Ensayo ABTS de la actividad de la fenol oxidasa en el suelo. Journal of Microbiological Methods. 71, 319–324.
  • Gaby WL, Hadley C. 1957. Prueba práctica de laboratorio para la identificación de Pseudomonas aeruginosa. Journal of bacteriology. 74, 356–358.
  • Gilani M, Munir T, Latif M, Gilani M, Rehman S, Ansari M, Hafeez A, Najeeb S, Saad N. 2015. Eficacia in vitro de doripenem contra Pseudomonas aeruginosa y Acinetobacter baumannii mediante E-test. Journal of the College of Physicians and Surgeons Pakistan 25, 726–729.
  • Kuss S, Tanner EEL, Ordovas-Montanes M, Compton R G. 2017. Reconocimiento electroquímico y cuantificación de la expresión del citocromo C en aerobios/anaerobios mediante ','-tetrametil-fenilendiamina (TMPD). Chemical Science 8.11, 7682–7688. Web.
  • Ivanova NV, Zemlak TS, Hanner RH, Hebert PD N. 2007. Cócteles de cebadores universales para la identificación de ADN de peces. Molecular Ecology Notes. 7, 544–54.
  • Prince C. 2009. Manual práctico de microbiología médica (Jaypee Brothers Medical Publishers (P) Ltd.) 112–112.
  • Shields P, Cathcart L. 2013. Protocolo de prueba de oxidasa - Biblioteca. Sociedad Americana de Microbiología, ASM MicrobeLibrary, 1–5.
  • Steel K J. 1961. La reacción de la oxidasa como herramienta taxonómica. Journal of General Microbiology. 25, 297–306.
  • Zanderigo F et al. 2018. Unión de [11C]harmina a la monoaminooxidasa A cerebral: propiedades de prueba-reprueba y cuantificación no invasiva. Molecular Imaging and Biology. 20, 667–681.
  • Vídeo de la prueba de oxidasa
  • Procedimiento de prueba de oxidasa