PMSF

En bioquímica , el fluoruro de fenilmetilsulfonilo ( PMSF ) es un inhibidor de serina proteasa (inactivador de serina hidrolasa) comúnmente utilizado en la preparación de lisados ​​celulares . El PMSF no inactiva todas las serina proteasas . ^{[ 1 ]} La concentración efectiva de PMSF está entre 0,1 y 1 mM. La vida media es corta en soluciones acuosas (110 min a pH 7, 55 min a pH 7,5 y 35 min a pH 8, todos a 25  °C). ^{[ 2 ]} A 4 °C, pH 8, el PMSF se degrada casi por completo después de 1 día. ^{[ 2 ]} Las soluciones madre generalmente se preparan en etanol anhidro , isopropanol o aceite de maíz y se diluyen inmediatamente antes de su uso.

El PMSF reacciona específicamente con el residuo de serina del sitio activo de las serina hidrolasas. No se une a ningún otro residuo de serina en la proteína. Esto se debe a la hiperactividad de dicho residuo de serina, causada por las condiciones ambientales específicas del sitio activo de la enzima ( triada catalítica ). Dado que el PMSF se une covalentemente a la enzima, el complejo puede visualizarse mediante cristalografía de rayos X; por lo tanto, puede utilizarse como marcador químico para identificar una serina esencial del sitio activo de una enzima.

_{Enzima ( activa )} Ser -OH + F-SO₂ CH₂ C₆H₅ → _Enzima Ser _- O- _SO₂ CH₂ C₆H₅ _{+ HF}

Proteasa de serina + PMSF → Complejo enzima-PMS irreversible + HF

La dosis letal media se sitúa entre 150 y 215  mg/kg ^{[ 3 ] [ 4 ]} ( inactivador de la acetilcolinesterasa ). El PMSF debe manipularse únicamente dentro de una campana extractora y con guantes. En ocasiones se recomienda el DMSO como disolvente para las soluciones madre, pero no debe utilizarse, ya que hace que la piel intacta sea permeable al PMSF.

La estabilidad del PMSF en soluciones acuosas es baja, ya que sufre hidrólisis con agua. Se informa que el PMSF es estable durante aproximadamente 6 meses a -20 °C en ^{DMSO [} 5 ] ^{y 9} meses a temperatura ambiente en isopropanol al 100 % ^{[ 2 ] [ 6 ]} .

La estructura de algunas proteínas limita la accesibilidad del PMSF, que es relativamente voluminoso, por lo que el PMSF es inactivo frente a enzimas de serina como la palmitoil-proteína tioesterasa . ^{[ 7 ]} Los reactivos de fluoruro de sulfonilo alternativos, como el p-APMSF y el HDSF , tienen un acceso alterado a las estructuras proteicas plegadas nativas y pueden reaccionar con enzimas de serina con las que el PMSF no reacciona eficazmente. Esta selectividad alterada entre los reactivos de fluoruro de sulfonilo se ha utilizado para clasificar y aislar tipos particulares de enzimas de serina. ^{[ 7 ]}

• AEBSF
• DFP (fluorofosfato de diisopropilo), un reactivo fosforilante de fluorofosfonato análogo

• La base de datos en línea MEROPS para peptidasas y sus inhibidores : PMSF