ADN polimerasa Pfu

A diferencia de la ADN polimerasa Taq , la ADN polimerasa Pfu posee actividad exonucleasa correctora de 3' a 5' , lo que significa que, a medida que el ADN se ensambla desde el extremo 5' al extremo 3' , la actividad exonucleasa elimina inmediatamente los nucleótidos incorporados erróneamente en el extremo 3' de la cadena de ADN en crecimiento. En consecuencia, los fragmentos de PCR generados por la ADN polimerasa Pfu tendrán menos errores que los insertos de PCR generados por Taq .

La enzima Pfu disponible comercialmente suele presentar una tasa de error de 1 en 1,3 millones de pares de bases y puede generar un 2,6 % de productos mutados al amplificar fragmentos de 1 kb mediante PCR. Sin embargo, Pfu es más lenta y generalmente requiere de 1 a 2 minutos por ciclo para amplificar 1 kb de ADN a 72  °C. El uso de la ADN polimerasa Pfu en reacciones de PCR también produce productos de PCR con extremos romos. ^{[ 4 ]}

Por lo tanto, la ADN polimerasa Pfu es superior a la ADN polimerasa Taq para técnicas que requieren síntesis de ADN de alta fidelidad, pero también puede utilizarse junto con la polimerasa Taq para obtener la fidelidad de Pfu con la velocidad de la actividad de la polimerasa Taq . ^{[ 5 ]}

Esta ADN polimerasa, similar a otras ADN polimerasas de arqueas , es sensible a los residuos de uracilo en el ADN y es fuertemente inhibida por dUTP o residuos de uracilo en el ADN. ^{[ 6 ]} La inhibición de esta clase de ADN polimerasas termoestables limita su uso en algunas aplicaciones de PCR, por ejemplo, el uso de dUTP para prevenir la contaminación cruzada, así como aplicaciones que involucran cebadores que contienen dU, como métodos de clonación sin ligasa o mutagénesis dirigida al sitio utilizando UNG. ^{[ 7 ]}