Tinción de plata

La tinción con plata facilita la visualización de objetivos de interés, a saber, componentes celulares intracelulares y extracelulares como el ADN y las proteínas , como el colágeno tipo III y las fibras de reticulina , mediante la deposición de partículas de plata metálica sobre los objetivos de interés. ^{[ 6 ]}

Pseudomonas , ^{[ 7 ]} Legionella , Leptospira , H. pylori , Bartonella y Treponema , y ​​hongos como Pneumocystis , Cryptococcus y Candida son organismos que se tiñen con plata.

La tinción con plata se utiliza en el cariotipado . El nitrato de plata tiñe la proteína asociada a la región de organización nucleolar (NOR), produciendo una zona oscura donde se deposita la plata, lo que indica la actividad de los genes de ARNr dentro de la NOR. Los cromosomas humanos 13, 14, 15, 21 y 22 poseen regiones NOR, que aumentan la actividad de la tinción con plata al menos 50 veces.

La tinción con plata se utiliza para teñir geles. La tinción con plata de proteínas en geles de agarosa fue desarrollada en 1973 por Kerenyi y Gallyas. ^{[ 8 ]} Posteriormente se adaptó a geles de poliacrilamida utilizados en SDS-PAGE , ^{[ 9 ] [ 10 ] [ 11 ] [ 12 ] [ 13 ]} y también para teñir ADN o ARN. ^{[ 14 ] [ 15 ]} Las glicosilaciones de glicoproteínas y polisacáridos pueden oxidarse mediante un pretratamiento de 1 hora con ácido periódico al 0,1 % a 4  °C, lo que mejora la unión de iones de plata y el resultado de la tinción. ^{[ 16 ]}

Primero, las proteínas se desnaturalizan en el gel con una solución fijadora de ácido acético al 10 % y etanol al 30 % , y se precipitan, extrayendo simultáneamente el detergente (principalmente SDS ). De esta forma, se reduce significativamente la difusión de las proteínas. Tras varios lavados con agua, el gel se incuba en una solución de nitrato de plata . Los iones de plata se unen a las cadenas laterales con carga negativa de las proteínas. El exceso de iones de plata se elimina con agua. En la etapa final de revelado, los iones de plata se reducen a plata elemental mediante la adición de formaldehído alcalino . Esto tiñe las zonas donde se encuentran las proteínas, de color marrón a negro.

La intensidad de la tinción depende de la estructura primaria de la proteína. Además, la limpieza de los recipientes utilizados y la pureza de los reactivos influyen en la tinción de plata. ^{[ 17 ]} Los artefactos comunes en los geles teñidos con plata son bandas de queratina en los rangos de 54–57 kDa y 65–68 kDa ^{[ 18 ]} como contaminación de la muestra antes de la electroforesis.

Existen varios tintes de plata que incorporan metenamina , entre ellos:

• La tinción de plata metenamina de Grocott se utiliza ampliamente como método de detección de organismos fúngicos .
• La tinción de Jones , una tinción de metenamina de plata- ácido periódico-Schiff que tiñe la membrana basal , permite visualizar la membrana basal glomerular "espiculada" asociada a la glomerulonefritis membranosa .