La prueba de Salkowski

Para realizar la prueba de Salkowski se necesita una muestra que se va a analizar para detectar esteroles, así como cloroformo y ácido sulfúrico concentrado , que constituyen el reactivo de Salkowski. Generalmente, primero se prepara la solución de cloroformo y la muestra, y luego se trata con ácido sulfúrico (VI) concentrado. Después, se debe agitar bien toda la solución. ^{[ 2 ] [ 6 ]} Es importante utilizar únicamente material de vidrio seco, ya que se produce una reacción de deshidratación durante el procedimiento de la prueba. ^{[ 7 ]}

Una solución que ha dado positivo en esta prueba química cualitativa presenta dos capas distintas en un tubo de ensayo; la capa superior (cloroformo) adquiere un color rojo azulado a violeta, mientras que la capa de ácido sulfúrico se torna amarilla a verde, con un brillo verdoso visible. Si una muestra no contiene colesterol ni otros esteroles, el color de la solución analizada permanece inalterado y conserva su color original. ^{[ 2 ] [ 8 ] [ 9 ]}

La prueba de Salkowski también puede utilizarse para detectar la presencia de indoles ( alcaloides cristalinos que son productos de degradación de proteínas, que contienen triptófano ^{[ 10 ]} ). En estos casos, la muestra se trata con ácido nítrico y una solución de nitrito de potasio al 2% , observándose una reacción positiva por la presencia de color rojo ^{[ 11 ] .}

El tratamiento de una solución de una muestra que contiene esteroles con cloroformo y ácido sulfúrico altamente higroscópico produce una reacción de deshidratación (se eliminan dos moléculas de agua de dos moléculas de colesterol) y la formación de nuevos enlaces dobles. Durante la reacción química, dos esteroles se unen y se forma un bisterol (bisteroide); en el caso del colesterol, se trata de un bicolestadien ( colesteno doble con dos enlaces dobles). El color rojo de la solución es consecuencia del ácido bisulfónico del bicolestadien, producto de la sulfonación del bicolestadien por el ácido sulfúrico. ^{[ 12 ] [ 13 ]}