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Nucleasa efectora similar a un activador de la transcripción

Dibujo de relleno espacial de la fusión dimérica TALE-FokI (azul: TALE; verde: FokI) unida al ADN ( PDB : 1FOK , 3UGM ) , por David Goodsell. Las nucleasas efectoras tipo activa...

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Dibujo de relleno espacial de la fusión dimérica TALE-FokI (azul: TALE; verde: FokI) unida al ADN ( PDB : 1FOK , 3UGM ) , por David Goodsell.

Las nucleasas efectoras tipo activador de la transcripción ( TALEN ) son enzimas de restricción que pueden diseñarse para cortar secuencias específicas de ADN. Se fabrican fusionando un dominio de unión al ADN del efector TAL a un dominio de escisión del ADN (una nucleasa que corta las cadenas de ADN). Los efectores tipo activador de la transcripción (TALEs) pueden diseñarse para unirse a prácticamente cualquier secuencia de ADN deseada, de modo que, al combinarse con una nucleasa, el ADN puede cortarse en ubicaciones específicas. [ 1 ] Las enzimas de restricción pueden introducirse en las células para su uso en la edición genética o en la edición del genoma in situ , una técnica conocida como edición del genoma con nucleasas diseñadas . Junto con las nucleasas de dedos de zinc y CRISPR/Cas9 , TALEN es una herramienta destacada en el campo de la edición del genoma .

Dominio de unión al ADN de TALE

Los efectores TAL son proteínas secretadas por bacterias Xanthomonas a través de su sistema de secreción tipo III cuando infectan plantas . [ 2 ] El dominio de unión al ADN contiene una secuencia repetida altamente conservada de 33 a 34 aminoácidos con aminoácidos divergentes en las posiciones 12 y 13. Estas dos posiciones, denominadas residuo variable repetido (RVD), son altamente variables y muestran una fuerte correlación con el reconocimiento específico de nucleótidos . [ 3 ] [ 4 ] Esta relación directa entre la secuencia de aminoácidos y el reconocimiento del ADN ha permitido la ingeniería de dominios de unión al ADN específicos mediante la selección de una combinación de segmentos repetidos que contienen los RVD apropiados. [ 1 ] Cabe destacar que pequeños cambios en el RVD y la incorporación de secuencias RVD "no convencionales" pueden mejorar la especificidad de la focalización. [ 5 ]

dominio de escisión del ADN

El dominio de escisión de ADN no específico del extremo de la endonucleasa FokI puede usarse para construir nucleasas híbridas que son activas en un ensayo de levadura. [ 6 ] [ 7 ] Estos reactivos también son activos en células vegetales [ 8 ] [ 9 ] y en células animales. [ 9 ] [ 10 ] [ 11 ] [ 12 ] Los estudios iniciales de TALEN usaron el dominio de escisión FokI de tipo silvestre, pero algunos estudios posteriores de TALEN [ 11 ] [ 13 ] [ 14 ] también usaron variantes del dominio de escisión FokI con mutaciones diseñadas para mejorar la especificidad de escisión [ 15 ] [ 16 ] y la actividad de escisión. [ 17 ] El dominio FokI funciona como un dímero, lo que requiere dos construcciones con dominios de unión al ADN únicos para sitios en el genoma objetivo con la orientación y el espaciamiento adecuados. Tanto el número de residuos de aminoácidos entre el dominio de unión al ADN de TALE y el dominio de escisión de FokI como el número de bases entre los dos sitios de unión TALEN individuales parecen ser parámetros importantes para lograr altos niveles de actividad. [ 10 ] [ 18 ]

La ingeniería de TALEN construye

La relación simple entre la secuencia de aminoácidos y el reconocimiento del ADN del dominio de unión TALE permite la ingeniería eficiente de proteínas. En este caso, la síntesis de genes artificiales es problemática debido al apareamiento inadecuado de la secuencia repetitiva que se encuentra en el dominio de unión TALE. [ 19 ] Una solución a esto es usar un programa de software disponible públicamente (DNAWorks [ 20 ] ) para calcular oligonucleótidos adecuados para el ensamblaje en un ensamblaje de oligonucleótidos PCR de dos pasos seguido de la amplificación del gen completo. También se han informado varios esquemas de ensamblaje modular para generar construcciones TALE diseñadas. [ 9 ] [ 19 ] [ 21 ] [ 22 ] [ 23 ] [ 24 ] Ambos métodos ofrecen un enfoque sistemático para diseñar dominios de unión al ADN que es conceptualmente similar al método de ensamblaje modular para generar dominios de reconocimiento de ADN de dedos de zinc .

Flujo de trabajo de edición genómica de Your Favorite Gene (YFG) mediante TALEN. Se identifica la secuencia diana, se diseña una secuencia TALEN correspondiente y se inserta en un plásmido. El plásmido se inserta en la célula diana, donde se traduce para producir la TALEN funcional, que entra en el núcleo y se une a la secuencia diana, cortándola. Según la aplicación, esto puede utilizarse para introducir un error (para inactivar un gen diana) o para introducir una nueva secuencia de ADN en el gen diana.

Transfección

Una vez ensamblados los constructos TALEN, se insertan en plásmidos ; las células diana se transfectan con estos plásmidos, y los productos génicos se expresan y entran en el núcleo para acceder al genoma. Alternativamente, los constructos TALEN pueden introducirse en las células como ARNm, lo que elimina la posibilidad de integración genómica de la proteína que expresa TALEN. El uso de un vector de ARNm también puede aumentar drásticamente el nivel de reparación dirigida por homología (HDR) y el éxito de la introgresión durante la edición genética.

Edición del genoma

Mecanismos

TALEN se puede utilizar para editar genomas induciendo roturas de doble cadena (DSB, por sus siglas en inglés), a las que las células responden con mecanismos de reparación.

La unión de extremos no homólogos (NHEJ) liga directamente el ADN de ambos lados de una rotura de doble cadena donde hay muy poca o ninguna superposición de secuencia para el apareamiento. Este mecanismo de reparación induce errores en el genoma a través de indels (inserciones o deleciones) o reordenamiento cromosómico; cualquier error de este tipo puede hacer que los productos génicos codificados en esa ubicación no sean funcionales. [ 10 ] Debido a que esta actividad puede variar según la especie, el tipo de célula, el gen diana y la nucleasa utilizada, debe ser monitoreada al diseñar nuevos sistemas. Se puede realizar un ensayo simple de escisión de heterodúplex que detecta cualquier diferencia entre dos alelos amplificados por PCR. Los productos de escisión pueden visualizarse en geles de agarosa simples o sistemas de gel de placa.

Alternativamente, el ADN puede introducirse en un genoma mediante NHEJ en presencia de fragmentos de ADN bicatenario exógenos. [ 10 ]

La reparación dirigida por homología también puede introducir ADN extraño en la rotura de doble cadena, ya que las secuencias de doble cadena transfectadas se utilizan como plantillas para las enzimas de reparación. [ 10 ]

Aplicaciones

TALEN se ha utilizado para modificar eficientemente los genomas de las plantas, [ 25 ] creando cultivos alimentarios de importancia económica con cualidades nutricionales favorables. [ 26 ] También se han aprovechado para desarrollar herramientas para la producción de biocombustibles . [ 27 ] Además, se ha utilizado para diseñar clones de células madre embrionarias humanas modificadas de forma estable y células madre pluripotentes inducidas (iPSC) y líneas celulares eritroides humanas, [ 11 ] [ 28 ] para generar C. elegans knockout , [ 12 ] ratas knockout , [ 13 ] ratones knockout, [ 29 ] y peces cebra knockout . [ 14 ] [ 30 ] Además, el método se puede utilizar para generar organismos knock-in. Wu et al. obtuvieron un bovino knock-in Sp110 utilizando nickasas Talen para inducir una mayor resistencia a la tuberculosis. [ 31 ] Este enfoque también se ha utilizado para generar ratas knock-in mediante microinyección de ARNm de TALEN en embriones de una célula. [ 32 ]

TALEN también se ha utilizado experimentalmente para corregir los errores genéticos que subyacen a las enfermedades. [ 33 ] Por ejemplo, se ha utilizado in vitro para corregir los defectos genéticos que causan trastornos como la enfermedad de células falciformes , [ 28 ] [ 34 ] el xeroderma pigmentoso , [ 35 ] y la epidermólisis bullosa . [ 36 ] Recientemente, se demostró que TALEN puede utilizarse como herramienta para aprovechar el sistema inmunitario para combatir el cáncer; la focalización mediada por TALEN puede generar células T resistentes a los fármacos quimioterapéuticos y mostrar actividad antitumoral. [ 37 ] [ 38 ]

En teoría, la especificidad genómica de las fusiones TALEN diseñadas permite corregir errores en loci genéticos individuales mediante reparación dirigida por homología a partir de una plantilla exógena correcta. [ 33 ] Sin embargo, en la práctica, la aplicación in situ de TALEN se ve actualmente limitada por la falta de un mecanismo de administración eficiente, factores inmunogénicos desconocidos e incertidumbre en la especificidad de la unión de TALEN. [ 33 ]

Otra aplicación emergente de TALEN es su capacidad para combinarse con otras herramientas de ingeniería genómica, como las meganucleasas . La región de unión al ADN de un efector TAL se puede combinar con el dominio de escisión de una meganucleasa para crear una arquitectura híbrida que combine la facilidad de ingeniería y la actividad de unión al ADN altamente específica de un efector TAL con la baja frecuencia de sitios y la especificidad de una meganucleasa. [ 39 ]

En comparación con otras técnicas de edición del genoma, TALEN se sitúa en un punto intermedio en términos de dificultad y coste. A diferencia de las ZFN , TALEN reconoce nucleótidos individuales. Es mucho más sencillo diseñar interacciones entre los dominios de unión al ADN de TALEN y sus nucleótidos objetivo que crear interacciones con las ZFN y sus tripletes de nucleótidos objetivo. [ 40 ] Por otro lado, CRISPR se basa en la formación de complejos de ribonucleótidos en lugar del reconocimiento de proteínas/ADN. Los ARN guía tienen ocasionalmente limitaciones en cuanto a su viabilidad debido a la falta de sitios PAM en la secuencia objetivo y, aunque se pueden producir a bajo coste, el desarrollo actual ha llevado a una notable disminución del coste de TALEN, de modo que se encuentran en un rango de precio y tiempo similar al de la edición del genoma basada en CRISPR .

precisión de la nucleasa efectora TAL

La actividad inespecífica de una nucleasa activa puede provocar roturas de doble cadena no deseadas y, en consecuencia, reordenamientos cromosómicos y/o muerte celular. Se han realizado estudios para comparar la toxicidad relativa asociada a la nucleasa de las tecnologías disponibles. Basándose en estos estudios [ 18 ] y en la distancia teórica máxima entre la unión al ADN y la actividad de la nucleasa, se cree que las construcciones TALEN ofrecen la mayor precisión entre las tecnologías disponibles actualmente. [ 41 ]

Véase también

Referencias

  1. 1 2 Boch J (febrero de 2011). "TALEs de la focalización del genoma". Nature Biotechnology . 29 (2): 135– 6. doi : 10.1038/nbt.1767 . PMID 21301438 . S2CID 304571 .  
  2. ↑ Boch J, Bonas U (septiembre de 2010). "Efectores de tipo III de la familia AvrBs3 de Xanthomonas: descubrimiento y función". Annual Review of Phytopathology . 48 (1): 419–36 . Bibcode : 2010AnRvP..48..419B . doi : 10.1146/annurev-phyto-080508-081936 . PMID 19400638 . 
  3. ↑ Boch J, Scholze H, Schornack S, Landgraf A, Hahn S, Kay S, Lahaye T, Nickstadt A, Bonas U (diciembre de 2009). "Descifrando el código de la especificidad de unión al ADN de los efectores TAL de tipo III". Science . 326 ( 5959): 1509– 12. Bibcode : 2009Sci...326.1509B . doi : 10.1126/science.1178811 . PMID 19933107. S2CID 206522347 .  
  4. ↑ Moscou MJ, Bogdanove AJ (diciembre de 2009). "Un cifrado simple rige el reconocimiento del ADN por efectores TAL". Science . 326 (5959): 1501. Bibcode : 2009Sci...326.1501M . doi : 10.1126/science.1178817 . PMID 19933106 . S2CID 6648530 .  
  5. ^ Juillerat A, Pessereau C, Dubois G, Guyot V, Maréchal A, Valton J, Daboussi F, Poirot L, Duclert A, Duchateau P (enero de 2015). "Ajuste optimizado de la especificidad de TALEN utilizando RVD no convencionales" . Informes científicos . 5 8150. Código Bib : 2015NatSR...5.8150J . doi : 10.1038/srep08150 . PMC 4311247 . PMID 25632877 .  
  6. ↑ Christian M, Cermak T, Doyle EL, Schmidt C, Zhang F, Hummel A, Bogdanove AJ, Voytas DF (octubre de 2010). "Dirigiendo las roturas de doble cadena del ADN con nucleasas efectoras TAL" . Genetics . 186 (2): 757– 61. doi : 10.1534/genetics.110.120717 . PMC 2942870. PMID 20660643 .  
  7. ↑ Li T, Huang S, Jiang WZ, Wright D, Spalding MH, Weeks DP, Yang B (enero de 2011). "Nucleasas TAL (TALN): proteínas híbridas compuestas de efectores TAL y dominio de escisión de ADN FokI" . Nucleic Acids Research . 39 (1): 359–72 . doi : 10.1093 / nar/gkq704 . PMC 3017587. PMID 20699274 .  
  8. ↑ Mahfouz MM, Li L, Shamimuzzaman M, Wibowo A, Fang X, Zhu JK (febrero de 2011). "Nucleasa híbrida efectora tipo activador de transcripción (TALE) de ingeniería de novo con especificidad de unión al ADN novedosa crea rupturas de doble cadena" . Actas de la Academia Nacional de Ciencias de los Estados Unidos de América . 108 (6): 2623– 8. Bibcode : 2011PNAS..108.2623M . doi : 10.1073/pnas.1019533108 . PMC 3038751. PMID 21262818 .  
  9. 1 2 3 Cermak T, Doyle EL, Christian M, Wang L, Zhang Y, Schmidt C, Baller JA, Somia NV, Bogdanove AJ, Voytas DF (julio de 2011). "Diseño y ensamblaje eficientes de construcciones personalizadas basadas en TALEN y otros efectores TAL para la focalización de ADN" . Nucleic Acids Research . 39 (12): e82. doi : 10.1093/nar/gkr218 . PMC 3130291. PMID 21493687 .  
  10. 1 2 3 4 5 Miller JC, Tan S, Qiao G, Barlow KA, Wang J, Xia DF, Meng X, Paschon DE, Leung E, Hinkley SJ, Dulay GP, Hua KL, Ankoudinova I, Cost GJ, Urnov FD, Zhang HS, Holmes MC, Zhang L, Gregory PD, Rebar EJ (febrero de 2011). "Una arquitectura de nucleasa TALE para la edición eficiente del genoma". Nature Biotechnology . 29 (2): 143– 8. doi : 10.1038/nbt.1755 . PMID 21179091 . S2CID 53549397 .  
  11. 1 2 3 Hockemeyer D, Wang H, Kiani S, Lai CS, Gao Q, Cassady JP, Cost GJ, Zhang L, Santiago Y, Miller JC, Zeitler B, Cherone JM, Meng X, Hinkley SJ, Rebar EJ, Gregory PD, Urnov FD, Jaenisch R (julio de 2011). " Ingeniería genética de células pluripotentes humanas utilizando nucleasas TALE" . Nature Biotechnology . 29 (8): 731– 4. doi : 10.1038/nbt.1927 . PMC 3152587. PMID 21738127 .  
  12. 1 2 Wood AJ, Lo TW, Zeitler B, Pickle CS, Ralston EJ, Lee AH, Amora R, Miller JC, Leung E, Meng X, Zhang L, Rebar EJ, Gregory PD, Urnov FD, Meyer BJ (julio de 2011). " Edición genómica dirigida entre especies mediante ZFN y TALEN" . Science . 333 (6040): 307. Bibcode : 2011Sci...333..307W . doi : 10.1126/science.1207773 . PMC 3489282. PMID 21700836 .  
  13. 1 2 Tesson L, Usal C, Ménoret S, Leung E, Niles BJ, Remy S, Santiago Y, Vincent AI, Meng X, Zhang L, Gregory PD, Anegon I, Cost GJ (agosto de 2011). "Ratas knockout generadas por microinyección de TALENs en embriones" . Nature Biotechnology . 29 (8): 695– 6. doi : 10.1038/nbt.1940 . PMID 21822240 . 
  14. 1 2 Huang P, Xiao A, Zhou M, Zhu Z, Lin S, Zhang B (agosto de 2011). "Integración genética heredable en pez cebra mediante TALENs personalizados". Nature Biotechnology . 29 (8): 699– 700. doi : 10.1038/nbt.1939 . PMID 21822242 . S2CID 28802632 .  
  15. ↑ Doyon Y, Vo TD, Mendel MC, Greenberg SG, Wang J, Xia DF, Miller JC, Urnov FD, Gregory PD, Holmes MC (enero de 2011). "Mejora de la actividad de la nucleasa de dedos de zinc con arquitecturas heterodiméricas obligadas mejoradas". Nature Methods . 8 (1): 74– 9. doi : 10.1038/nmeth.1539 . PMID 21131970. S2CID 14334237 .  
  16. ↑ Szczepek M, Brondani V, Büchel J, Serrano L, Segal DJ, Cathomen T (julio de 2007). "El rediseño basado en la estructura de la interfaz de dimerización reduce la toxicidad de las nucleasas de dedos de zinc" ( PDF) . Nature Biotechnology . 25 (7): 786–93 . doi : 10.1038/nbt1317 . PMID 17603476. S2CID 22079561 .  
  17. ↑ Guo J, Gaj T, Barbas CF (julio de 2010). "Evolución dirigida de un dominio de escisión FokI mejorado y altamente eficiente para nucleasas de dedos de zinc" . Journal of Molecular Biology . 400 (1): 96– 107. doi : 10.1016/j.jmb.2010.04.060 . PMC 2885538. PMID 20447404 .  
  18. 1 2 Mussolino C, Morbitzer R, Lütge F, Dannemann N, Lahaye T, Cathomen T (noviembre de 2011). " Un nuevo andamiaje de nucleasa TALE permite una alta actividad de edición del genoma en combinación con baja toxicidad" . Nucleic Acids Research . 39 (21): 9283– 93. doi : 10.1093/nar/gkr597 . PMC 3241638. PMID 21813459 .  
  19. 1 2 Zhang F, Cong L, Lodato S, Kosuri S, Church GM, Arlotta P (febrero de 2011). "Construcción eficiente de efectores TAL específicos de secuencia para modular la transcripción de mamíferos" . Nature Biotechnology . 29 (2): 149– 53. doi : 10.1038/nbt.1775 . PMC 3084533. PMID 21248753 .  
  20. ↑ Hoover D (2012). "Uso de DNAWorks en el diseño de oligonucleótidos para la síntesis de genes basada en PCR". Síntesis de genes . Métodos en biología molecular. Vol. 852. págs. 215–23 . doi : 10.1007/978-1-61779-564-0_16 . ISBN   978-1-61779-563-3. PMID 22328436 . 
  21. ↑ Morbitzer R, Elsaesser J, Hausner J, Lahaye T (julio de 2011). "Ensamblaje de dominios de unión al ADN de tipo TALE personalizados mediante clonación modular" . Nucleic Acids Research . 39 (13): 5790–9 . doi : 10.1093/nar/gkr151 . PMC 3141260. PMID 21421566 .  
  22. ↑ Li T, Huang S, Zhao X, Wright DA, Carpenter S, Spalding MH, Weeks DP, Yang B (agosto de 2011). "Nucleasas efectoras TAL de diseño ensamblado modularmente para la eliminación dirigida de genes y el reemplazo de genes en eucariotas" . Nucleic Acids Research . 39 (14): 6315–25 . doi : 10.1093/nar/gkr188 . PMC 3152341. PMID 21459844 .  
  23. ↑ Geissler R, Scholze H, Hahn S, Streubel J, Bonas U, Behrens SE, Boch J (2011). Shiu SH (ed.). " Activadores transcripcionales de genes humanos con especificidad de ADN programable" . PLOS ONE . 6 (5) e19509. Bibcode : 2011PLoSO...619509G . doi : 10.1371/journal.pone.0019509 . PMC 3098229. PMID 21625585 .  
  24. ↑ Weber E, Gruetzner R, Werner S, Engler C, Marillonnet S (2011). Bendahmane M (ed.). " Ensamblaje de efectores TAL de diseño mediante clonación Golden Gate" . PLOS ONE . 6 (5) e19722. Bibcode : 2011PLoSO...619722W . doi : 10.1371/journal.pone.0019722 . PMC 3098256. PMID 21625552 .  
  25. ↑ Zhang Y, Zhang F, Li X, Baller JA, Qi Y, Starker CG, Bogdanove AJ, Voytas DF (enero de 2013). "Las nucleasas efectoras tipo activador de la transcripción permiten una ingeniería eficiente del genoma vegetal" . Plant Physiology . 161 (1): 20– 7. doi : 10.1104/pp.112.205179 . PMC 3532252. PMID 23124327 .  
  26. ↑ Haun W, Coffman A, Clasen BM, Demorest ZL, Lowy A, Ray E, Retterath A, Stoddard T, Juillerat A, Cedrone F, Mathis L, Voytas DF, Zhang F (septiembre de 2014). "Mejora de la calidad del aceite de soja mediante mutagénesis dirigida de la familia de genes de la desaturasa de ácidos grasos 2" . Plant Biotechnology Journal . 12 (7): 934–40 . Bibcode : 2014PBioJ..12..934H . doi : 10.1111/pbi.12201 . PMID 24851712 . 
  27. ↑ Daboussi F, Leduc S, Maréchal A, Dubois G, Guyot V, Perez-Michaut C, Amato A, Falciatore A, Juillerat A, Beurdeley M, Voytas DF, Cavarec L, Duchateau P (mayo de 2014). "La ingeniería genómica potencia la diatomea Phaeodactylum tricornutum para la biotecnología" . Nature Communications . 5 3831. Bibcode : 2014NatCo...5.3831D . doi : 10.1038/ncomms4831 . PMID 24871200 . 
  28. 1 2 Wienert B, Funnell AP, Norton LJ, Pearson RC, Wilkinson-White LE, Lester K, Vadolas J, Porteus MH, Matthews JM, Quinlan KG, Crossley M (2015). "Editing the genome to introduzca a benefit naturally occur mutation associated with increased fetal globin" . Nature Communications . 6 7085. Bibcode : 2015NatCo...6.7085W . doi : 10.1038/ncomms8085 . hdl : 1959.4/unsworks_49831 . PMID 25971621 . 
  29. ↑ Davies B, Davies G, Preece C, Puliyadi R, Szumska D, Bhattacharya S (2013). "Mutación específica del sitio del locus Zic2 mediante microinyección de ARNm de TALEN en ovocitos de ratón CD1, C3H y C57BL/6J" . PLOS ONE . 8 (3) e60216. Bibcode : 2013PLoSO...860216D . doi : 10.1371/journal.pone.0060216 . PMC 3610929. PMID 23555929 .  
  30. ↑ Sander JD, Cade L, Khayter C, Reyon D, Peterson RT, Joung JK, Yeh JR (agosto de 2011). "Interrupción génica dirigida en células somáticas de pez cebra mediante TALENs modificados" . Nature Biotechnology . 29 (8): 697–8 . doi : 10.1038/nbt.1934 . PMC 3154023. PMID 21822241 .  
  31. ↑ Wu H, Wang Y, Zhang Y, Yang M, Lv J, Liu J, Zhang Y (marzo de 2015). "La inserción transgénica de SP110 mediada por la nickasa TALE confiere al ganado una mayor resistencia a la tuberculosis" . Actas de la Academia Nacional de Ciencias de los Estados Unidos de América . 112 (13): E1530-9. Bibcode : 2015PNAS..112E1530W . doi : 10.1073/pnas.1421587112 . PMC 4386332. PMID 25733846 .  
  32. ↑ Ponce de León V, Mérillat AM, Tesson L, Anegón I, Hummler E (2014). "Generación de ratas knock-in GRdim mediadas por TALEN mediante recombinación homóloga" . MÁS UNO . 9 (2) e88146. Código Bib : 2014PLoSO...988146P . doi : 10.1371/journal.pone.0088146 . PMC 3921256 . PMID 24523878 .  
  33. 1 2 3 Carlson DF, Fahrenkrug SC, Hackett PB (enero de 2012). "Dirigiendo el ADN con dedos y TALENs" . Terapia molecular: ácidos nucleicos . 1 (3) e3. doi : 10.1038/mtna.2011.5 . PMC 3381595. PMID 23344620 .  
  34. ↑ Ramalingam S, Annaluru N, Kandavelou K, Chandrasegaran S (2014). "Generación mediada por TALEN y corrección genética de células madre pluripotentes inducidas humanas específicas de la enfermedad". Current Gene Therapy . 14 (6): 461– 72. doi : 10.2174/1566523214666140918101725 . PMID 25245091 . 
  35. ^ Dupuy A, Valton J, Leduc S, Armier J, Galetto R, Gouble A, Lebuhotel C, Stary A, Pâques F, Duchateau P, Sarasin A, Daboussi F (2013). "Terapia génica dirigida de células de xeroderma pigmentoso utilizando meganucleasa y TALEN ™" . MÁS UNO . 8 (11) e78678. Código Bib : 2013PLoSO...878678D . doi : 10.1371/journal.pone.0078678 . PMC 3827243 . PMID 24236034 .  
  36. ^ Osborn MJ, Starker CG, McElroy AN, Webber BR, Riddle MJ, Xia L, DeFeo AP, Gabriel R, Schmidt M, von Kalle C, Carlson DF, Maeder ML, Joung JK, Wagner JE, Voytas DF, Blazar BR, Tolar J (junio de 2013). "Corrección genética basada en TALEN para la epidermólisis ampollosa" . Terapia Molecular . 21 (6): 1151– 9. doi : 10.1038/mt.2013.56 . PMC 3677309 . PMID 23546300 .  
  37. ↑ Valton J, Guyot V, Marechal A, Filhol JM, Juillerat A, Duclert A, Duchateau P, Poirot L (septiembre de 2015). "Una célula T CAR modificada resistente a múltiples fármacos para inmunoterapia combinada alogénica" . Molecular Therapy . 23 (9): 1507–18 . doi : 10.1038/mt.2015.104 . PMC 4817890. PMID 26061646 .  
  38. ↑ Poirot L, Philip B, Schiffer-Mannioui C, Le Clerre D, Chion-Sotinel I, Derniame S, Potrel P, Bas C, Lemaire L, Galetto R, Lebuhotel C, Eyquem J, Cheung GW, Duclert A, Gouble A, Arnould S, Peggs K, Pule M, Scharenberg AM, Smith J (septiembre de 2015). "Plataforma de fabricación de células T editadas genómicamente multiplex para inmunoterapias adoptivas de células T "listas para usar" . Cancer Research . 75 (18): 3853– 64. doi : 10.1158/0008-5472.CAN-14-3321 . PMID 26183927 . 
  39. ↑ Boissel S, Jarjour J, Astrakhan A, Adey A, Gouble A, Duchateau P, Shendure J, Stoddard BL, Certo MT, Baker D, Scharenberg AM (febrero de 2014). "megaTALs: una arquitectura de nucleasa de corte poco frecuente para la ingeniería genómica terapéutica" . Nucleic Acids Research . 42 (4): 2591– 601. doi : 10.1093/nar/gkt1224 . PMC 3936731. PMID 24285304 .  
  40. ↑ "Ventajas y desventajas de ZFNS, TALEN y CRISPR/CAS" . The Jackson Laboratory . Marzo de 2014.
  41. ↑ Boglioli, Elsy; Richard, Magali. "Boston Consulting Group - Informe sobre la precisión de la edición genética" (PDF) .
  • E-TALEN.org Una herramienta integral para el diseño de TALEN
  • Molécula del mes de PDB: Una entrada en el resumen estructural mensual de la base de datos de proteínas.