Inclinación TSI

La prueba de hierro triple azúcar ( TSI ) es una prueba microbiológica cuyo nombre se debe aproximadamente a su capacidad para evaluar la capacidad de un microorganismo para fermentar azúcares y producir sulfuro de hidrógeno . ^{[ 1 ]} Se utiliza a menudo para diferenciar bacterias entéricas, incluidas Salmonella y Shigella .

El tubo de ensayo TSI inclinado contiene agar , un colorante sensible al pH ( rojo fenol ), 1% de lactosa , 1% de sacarosa , 0,1% de glucosa , ^{[ 2 ]} y tiosulfato de sodio y sulfato ferroso o sulfato ferroso amónico .

Todos estos ingredientes se mezclan, se calientan hasta esterilizarlos y se dejan solidificar en un tubo de ensayo inclinado. La forma inclinada de este medio proporciona una variedad de superficies que están expuestas al aire con oxígeno en distintos grados (un ambiente aeróbico) o que no están expuestas al aire (un ambiente anaeróbico).

El medio de cultivo TSI se desarrolló a partir del agar de hierro de Kligler , que se había utilizado para la determinación de bacterias fermentadoras de lactosa, mediante la adición de sacarosa para poder detectar también bacterias fermentadoras de sacarosa. ^{[ 3 ]}

Las bacterias que fermentan cualquiera de los tres azúcares del medio producirán subproductos. ^{[ 4 ]} Estos subproductos suelen ser ácidos, que cambian el color del colorante rojo sensible al pH (rojo de fenol) a amarillo. La posición del cambio de color distingue la producción de ácido asociada a la fermentación de glucosa de los subproductos ácidos de la fermentación de lactosa o sacarosa. Si esto ocurre, el sulfuro de hidrógeno recién formado ( H_El sulfato ferroso ( S) reacciona conel sulfato ferrosodel medio para formarsulfuro ferroso, que se observa como un precipitado negro. Ejemplos de bacterias productoras de sulfuro incluyenSalmonella,Proteus,CitrobacteryEdwardsiella. El oscurecimiento del medio se observa casi siempre en la parte inferior del mismo.

Una bacteria que no fermenta la lactosa pero sí la glucosa, inicialmente produce un fondo amarillo en la superficie inclinada (reacción ácido-ácido) después de 8 horas, pero luego se transforma en un fondo amarillo rojo en la superficie inclinada después de 24 horas (reacción ácido-álcali). En cambio, si fermenta tanto lactosa como glucosa, el tubo se vuelve amarillo y permanece así debido a la gran cantidad de ácido producido en la reacción. El ennegrecimiento del fondo debido a la producción de H₂S _puede enmascarar la reacción ácida (amarilla) en el fondo del tubo. Salmonella enterica serovar Typhi puede provocar el ennegrecimiento del medio en la interfaz entre el fondo y la superficie inclinada.

En condiciones anaeróbicas (como las que se dan en la parte inferior del tubo), algunas bacterias utilizan tiosulfato como aceptor de electrones y lo reducen a hidrógeno gaseoso. Este es poco soluble y puede acumularse en forma de burbujas a lo largo del trayecto de inoculación, entre el agar y el vidrio, o en el líquido que se acumula en el fondo del tubo inclinado. La producción de hidrógeno puede levantar el agar del fondo del tubo o fracturarlo. El dióxido de carbono, si se produce, puede no aparecer en forma de burbujas porque es mucho más soluble en el medio.

• Agar tríptico de cistina