Resistencia al ácido

La acidez-resistencia es una propiedad física de ciertas bacterias , protozoos y células eucariotas , así como de algunas estructuras subcelulares , que se refiere a su resistencia a la decoloración por ácidos durante los procedimientos de tinción de laboratorio . ^{[ 1 ] [ 2 ]} Una vez teñidos como parte de una muestra, estos organismos pueden resistir los procedimientos de decoloración a base de ácido y/o etanol comunes en muchos protocolos de tinción, de ahí el nombre de ácido-resistente . ^{[ 2 ]}

Históricamente, se creía que las tinciones ácido-resistentes teñían los lípidos de las células basándose en las características observadas de la tinción celular en una amplia gama de condiciones, ^{[ 3 ] [ 4 ]} aunque los resultados estaban limitados por las herramientas disponibles; sin embargo, ya en 1959 se observaron cómo los ácidos nucleicos eran ácido-resistentes. ^{[ 5 ]} Colorantes como la fucsina de carbol y la auramina O penetran en la célula y se unen al ADN y al ARN, produciendo una fluorescencia roja o amarillo-verdosa característica, respectivamente. La propiedad de "ácido-resistencia" refleja, por lo tanto, la capacidad del organismo para retener estos colorantes después de la decoloración ácido-alcohol, una característica determinada principalmente por la integridad y composición de la pared celular externa más que por alguna química lipídica específica. ^{[ 6 ]}

Los mecanismos de acidificación varían según la especie. En el género Mycobacterium , esta propiedad se ha atribuido tradicionalmente al alto contenido de ácido micólico de la pared celular , que contribuye a la retención del colorante y a la resistencia a la decoloración. Sin embargo, muchos otros organismos acidófobos, como las coccidias intestinales y los helmintos parásitos del género Schistosoma , carecen de ácidos micólicos pero presentan una acidificación comparable, lo que sugiere que otras estructuras de la pared celular, como las paredes de los quistes o las cáscaras de los huevos, pueden proporcionar una resistencia similar a la decoloración. ^{[ 6 ]}

Otras evidencias histopatológicas respaldan este mecanismo más amplio: en cortes de tejido, la intensidad de la tinción se reduce notablemente cuando las paredes celulares bacterianas están dañadas o cuando se utiliza desparafinización con xileno durante el procesamiento de la muestra. Se ha demostrado que un método sin xileno, basado en calor, preserva la integridad de la pared celular y mejora sustancialmente la detección de micobacterias y otros microorganismos ácido-resistentes, especialmente cuando se utiliza tinción fluorescente con auramina O. ^{[ 7 ]}

Los microorganismos ácido-resistentes son difíciles de caracterizar mediante técnicas microbiológicas estándar, aunque pueden teñirse con colorantes concentrados, especialmente cuando el proceso de tinción se combina con calor. Algunos, como las micobacterias , pueden teñirse con la tinción de Gram , pero no absorben bien el cristal violeta y, por lo tanto, aparecen de color púrpura claro, lo que aún puede dar lugar a una identificación errónea como gramnegativos. ^{[ 8 ]}

La técnica de tinción más común para identificar bacterias ácido-resistentes es la tinción de Ziehl-Neelsen , en la que las especies ácido-resistentes aparecen de color rojo brillante sobre un fondo azul. Otro método es el de Kinyoun , en el que las bacterias aparecen de color rojo sobre un fondo verde. La microscopía de fluorescencia con auramina O —un fluorocromo que se une a los ácidos nucleicos— ha reemplazado en gran medida a estas técnicas en los laboratorios clínicos debido a su mayor sensibilidad, rapidez y seguridad. La rodamina, que a veces se añade como colorante secundario, contribuye poco a la sensibilidad, pero mejora ligeramente el contraste. ^{[ 9 ] [ 6 ] [ 7 ]}

• Tinción de Ziehl-Neelsen (tipos de blanqueamiento clásico y modificado) ^{[ 10 ]}
• Tinción de Kinyoun , un revelado de ZN que no requiere calentamiento; variantes:
  • Tintes alternativos ( azul Victoria en lugar de fucsina, ácido pícrico en lugar de azul de metileno ), que son útiles para personas daltónicas y materiales donde los tintes clásicos ZN/Kinyoun proporcionan una legibilidad insuficiente. ^{[ 11 ]}
  • Método de Moeller
  • Método de Dorner ^{[ 12 ]} (decolorante de alcohol ácido) sin la modificación de Schaeffer-Fulton ^{[ 13 ]} (decoloración con agua) ^{[ 14 ]}
  • Método detergente, utilizando Tergitol 7, surfactantes de éter de poliglicol no iónicos tipo NP-7 para la decoloración ^{[ 15 ].}
• Tinción de Fite ^{[ 16 ]}
  • Tinción de Fite-Faraco ^{[ 17 ] [ 18 ]}
  • Mancha de Wade Fite ^{[ 19 ]}
• Tinción de Ellis y Zabrowarny ^{[ 20 ] [ 21 ]} (sin fenol/ácido carbólico)
• tinción de auramina-rodamina
• tinción de fenol de auramina

Muy pocas estructuras son ácido-resistentes; esto hace que la tinción para detectar la acidez sea particularmente útil en el diagnóstico. A continuación se presentan ejemplos notables de estructuras que son ácido-resistentes o ácido-resistentes modificadas:

• Todas las micobacterias : M. tuberculosis , M. leprae , M. smegmatis y micobacterias atípicas .
• Ciertas actinobacterias (especialmente las aerobias del orden Mycobacteriales ) poseen ácido micólico en su pared celular; no deben confundirse con Actinomyces , un género de actinomicetos no ácido-resistentes . Cabe destacar que Streptomyces no contiene ácido micólico.
  • Nocardia (débilmente ácido-resistente; resiste la decoloración con concentraciones ácidas más débiles)
  • Rodococcus
  • Gordonia
  • Tsukamurella
  • Dietzia
• Cabeza del espermatozoide
• Esporas bacterianas, véase Endospora
• Legionella micdadei
• Ciertas inclusiones celulares, por ejemplo
  • Cuerpos de inclusión citoplasmáticos observados en
    • Neuronas en la capa 5 de la corteza cerebral con lipofuscinosis ceroidea neuronal ( enfermedad de Batten ).
  • Cuerpos de inclusión nuclear observados en
    • Saturnismo
    • Intoxicación por bismuto.
• Ooquistes de algunos parásitos coccidios en materia fecal, tales como:
  • Cryptosporidium parvum , ^{[ 22 ]}
  • Isospora belli ^{[ 23 ]}
  • Cyclospora cayetanensis . ^{[ 24 ]}
• Otros parásitos:
  • Sarcocistis
  • Los huevos de Taenia saginata se tiñen bien, pero los de Taenia solium no (esto puede usarse para distinguirlos).
  • Los quistes hidatídicos , especialmente sus " ganchos ", se tiñen de forma irregular con la tinción de Ziehl-Neelsen, pero emiten una fluorescencia roja brillante bajo luz verde, y pueden ayudar a detectarlos en fondos moderadamente densos o con escasos ganchos. ^{[ 25 ]}
• Las formas de levadura fúngica se tiñen de manera inconsistente con la tinción ácido-resistente, que se considera una tinción de espectro estrecho para hongos. ^{[ 26 ]} En un estudio sobre la ácido-resistencia de los hongos, ^{[ 27 ]} el 60% de los blastomyces y el 47% de los histoplasmas mostraron tinción citoplasmática positiva de las células similares a levaduras, y Cryptococcus o Candida no se tiñeron, y se observó una tinción muy rara en las endosporas de Coccidioides.